銅綠假單胞菌中PA4857對(duì)Ⅲ型分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）是一種條件致病菌，能引起人體急性和慢性感染。急性感染主要與三型分泌系統(tǒng)(typeⅢsecretion system，T3SS)和運(yùn)動(dòng)能力有關(guān)，而慢性感染主要與六型分泌系統(tǒng)(typeⅥsecretion system，T6SS)和生物被膜有關(guān)。銅綠假單胞菌可以利用T3SS向宿主分泌毒性蛋白，逃避吞噬細(xì)胞的吞噬，引起宿主上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的損傷，破壞胞內(nèi)信號(hào)或者導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

2、銅綠假單胞菌主要分泌4種毒性蛋白來(lái)發(fā)揮作用:包括胞外酶S(ExoS)，胞外酶T(ExoT)，胞外酶U(ExoU)以及胞外酶Y(ExoY)。目前，T3SS調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的研究并不清楚，還有很多未知的調(diào)控因子沒(méi)有發(fā)現(xiàn)。本研究以銅綠假單胞菌的效應(yīng)蛋白ExoS作為突破點(diǎn)，通過(guò)構(gòu)建轉(zhuǎn)座突變庫(kù)篩選對(duì)exoS的表達(dá)有調(diào)控的基因。將exoS的啟動(dòng)子與lux報(bào)道子融合，整合至PAO1菌株中，并在此菌的基礎(chǔ)上構(gòu)建轉(zhuǎn)座突變體庫(kù)。根據(jù)發(fā)光強(qiáng)弱的變化，結(jié)果共篩選到15

3、個(gè)影響exoS表達(dá)的基因，包括已知的exsA，pcrD和vqsM等，以及幾個(gè)未知功能的基因，如:PA5264，PA4857等。
　　本文對(duì)PA4857進(jìn)行了重點(diǎn)研究(根據(jù)PA4857功能將其命名為tspR)。在PAO1中敲除掉tspR基因(AtspR)，發(fā)現(xiàn)效應(yīng)蛋白ExoS、生物被膜的形成量以及細(xì)胞毒性均降低，突變體對(duì)小鼠的致病能力也有所影響。進(jìn)一步的研究還發(fā)現(xiàn)tspR對(duì)調(diào)控RsmA的兩個(gè)小RNA:RsmY和RsmZ，均有負(fù)調(diào)控作

4、用。ExoS在兩個(gè)雙突變?chǔ)spRΔrsmY、ΔtspRΔrsmZ中的表達(dá)量以及生物被膜的形成量基本恢復(fù)到野生型水平。同時(shí)，在retS突變體中，T3SS的表達(dá)量和生物被膜的形成量可以通過(guò)過(guò)表達(dá)tspR而部分恢復(fù)到野生型水平。這說(shuō)明RetS正調(diào)節(jié)tspR，而TspR通過(guò)調(diào)控兩個(gè)小RNA(RsmY/RsmZ)來(lái)調(diào)控T3SS。因此，本研究發(fā)現(xiàn)了一個(gè)與retS-gacS系統(tǒng)相協(xié)調(diào)的新的調(diào)控途徑:retS-tspR途徑。這些研究結(jié)果為進(jìn)一步理解T