AcSDKP對體外培養(yǎng)條件下人骨髓間充質(zhì)干細胞生長的影響.pdf

1、N-乙?；?絲氨酰-天冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸(AcSDKP)是一種具有生理調(diào)控活性的肽類因子，最初是從胎牛骨髓中發(fā)現(xiàn)的。早先的一系列實驗顯示，這種四肽因子可通過阻止造血干/祖細胞進入S期，使其停留在G0期，而發(fā)揮細胞增殖抑制作用。后來的研究表明，AcSDKP對非造血細胞如淋巴細胞，腎間質(zhì)成纖維細胞和心肌成纖維細胞等也有生長抑制作用。本實驗室近來的工作發(fā)現(xiàn)，AcSDKP能抑制體外培養(yǎng)條件下小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(MSC)的增殖，本研究旨在通

2、過分離、純化和培養(yǎng)人骨髓MSC，進一步探究該因子對骨髓MSC的生長調(diào)控活性和作用機制。 本研究通過分離人骨髓單個核細胞，并在傳代培養(yǎng)出純化MSC及鑒定其增殖和分化能力的基礎(chǔ)上，采用集落形成實驗、甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法、細胞分裂指數(shù)測定、5'-溴脫氧尿苷(BrdU)摻入和流式細胞術(shù)等方法，觀察了AcSDKP對體外培養(yǎng)的人骨髓MSC增殖速率的影響，檢測了在AcSDKP作用下MSC的DNA合成和細胞周期活動，還觀察了AcSDK

3、P對這些干細胞作用的可逆性和血清濃度對其作用的影響，以及該因子對這種骨髓干細胞貼壁能力的影響。結(jié)果如下：(1)在AcSDKP濃度為10-12ol/L～10-9mol/L的培養(yǎng)體系中，人骨髓MSC的集落生成率和大小、活力細胞數(shù)和分裂指數(shù)均減低，最大效應(yīng)濃度為10-11mol/L。(2)在AcSDKP濃度為10-12ol/L～10-10mol/L的MSC培養(yǎng)體系中，BrdU標記陽性細胞數(shù)顯著減少；S+G2/M期細胞的比率降低，G0/G1期細

4、胞明顯增加。(3)在所加AcSDKP的終濃度為10-11mol/L的體系中，將已貼附于培養(yǎng)板的人骨髓單個核細胞培養(yǎng)3天后，撤除AcSDKP，MSC的生長速率恢復(fù)，其集落生成數(shù)明顯多于不撤除AcSDKP的培養(yǎng)體系。(4)如果將培養(yǎng)體系的血清濃度增至40％，MSC集落生成的抑制率明顯小于較低血清濃度組。(5)將MSC種入AcSDKP濃度為10-12mol/L～10-9mol/L的培養(yǎng)體系24h后，貼壁細胞數(shù)與對照組比較明顯減少。