人類新基因ARHGAP12的功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該實(shí)驗(yàn)室從人胎腦cDNA文庫中分離到一條新的rhlGAP基因,它具有兩種剪接形式.生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)它有20個(gè)外顯子,位于10p12.它的蛋白產(chǎn)物有5個(gè)結(jié)構(gòu)域:SH、WW、WW、PH和rhoGAP.命名規(guī)則它被命名為ARHGAP12.在生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上,我們對該基因進(jìn)行了以下的實(shí)驗(yàn)研究.①表達(dá)譜分析.通過PCR和Northern雜交,我們分析了它在正常組織和腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)它是廣譜表達(dá)的;②胞內(nèi)過表達(dá)分析.該基因的編碼區(qū)被

2、轉(zhuǎn)染入HO8910細(xì)胞以觀察可能的對宿主細(xì)胞在形態(tài)和增殖能力上的影響,結(jié)果表明它在胞內(nèi)過表達(dá)可刺激宿主細(xì)胞的增殖能力;③綠熒光蛋白定位.用該方法我們檢測了該基因產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)的定位,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在靜息狀態(tài)下它主要分布于細(xì)胞質(zhì)中;④GAP活性分析.為測定該基因的RhoGAP結(jié)構(gòu)域的活性,我們將其原核表達(dá)并進(jìn)行了體外GAP活性分析實(shí)驗(yàn),結(jié)果排除了該結(jié)構(gòu)域?qū)hoA,Racl和Cdc42Hs的GAP活性;⑤體外親和層析法結(jié)合實(shí)驗(yàn).原核表達(dá)了該基因的

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