因?qū)幤苿┕に嚰捌鋵卓宏幪撔∈蟮乃幚碜饔醚芯?pdf

1、研究背景:甲狀腺功能亢進(jìn)癥(簡稱:甲亢)系指由多種病因?qū)е麦w內(nèi)甲狀腺素分泌過多,引起以神經(jīng)、循環(huán)、消化等系統(tǒng)興奮性增高和代謝亢進(jìn)為主要表現(xiàn)的一組疾病的總稱,是一種臨床綜合征,常見癥狀為多食易饑、體重減輕、心動過速、乏力、急躁、易激動等。甲亢病因較為復(fù)雜,其確切發(fā)病機(jī)制尚未明確,臨床上以彌漫性毒性甲狀腺腫最常見,約占所有甲亢患者的85％,其次為結(jié)節(jié)性甲狀腺腫伴甲亢和亞急性甲狀腺炎伴甲亢。中醫(yī)將本病歸于“癭、癭氣”范疇。一般認(rèn)為其發(fā)病因為首

2、先在于患者素體陰虧,腎陰不足,陰虛陽亢,加上情志失調(diào),變生陰虛火旺、氣陰兩虛、痰濕阻滯等病機(jī),其病位涉及肝、腎、心、脾、肺,而以肝腎為主[1]。
　　 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)目前多采用抗甲狀腺藥物治療及放射性碘和手術(shù)等措施。抗甲狀腺藥物的作用是抑制甲狀腺合成甲狀腺激素,后兩種是通過破壞甲狀腺組織減少甲狀腺激素的產(chǎn)生達(dá)到治療目的[2]。然而三者對甲亢均不能進(jìn)行病因治療,且容易發(fā)生粒細(xì)胞減少、藥疹、肝損害等不良反應(yīng)。
　　 近十年來中醫(yī)藥

3、治療甲亢有了可喜的進(jìn)展,新的治療方劑的出現(xiàn)和治療方法的不斷完善,使其在改善甲亢癥狀、調(diào)節(jié)人體免疫機(jī)制等方面顯示出獨特優(yōu)勢,使臨床療效得到了提高,且毒副反應(yīng)小,降低了復(fù)發(fā)率,而且在一定程度上揭示了中藥治療甲亢的作用機(jī)理,逐漸受到中外研究者的重視。愈來愈多的研究表明:中藥將在未來防治甲亢中發(fā)揮肯定作用。
　　 因?qū)幤瑸閺V州南方醫(yī)院臨床經(jīng)驗方,它是以中醫(yī)理論為依據(jù),借助現(xiàn)代科技,從藥理學(xué)、病理學(xué)等多學(xué)科角度入手,篩選了上百種中草藥,最

4、終由黃芪、昆明山海棠、鱉甲、當(dāng)歸、生地、甘草等九味中藥科學(xué)配伍研制而成,諸藥相和,共奏養(yǎng)陰軟堅,解毒散結(jié)之功。經(jīng)臨床觀察表明:因?qū)幤瑢﹃幪撔?、痰濕型、血瘀型甲亢均具有較好的臨床療效,可以有效地消除甲亢癥狀,快速修復(fù)機(jī)體各個系統(tǒng)的正常功能,全面提高自身的免疫功能,達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。而且初步預(yù)試驗顯示:因?qū)幤瑢Ω闻K具有保護(hù)作用,避免了甲亢本身以及抗甲狀腺藥物引起的肝損害,填補(bǔ)了抗甲亢藥物防肝損害治療的用藥空白。
　　 本研究課題將

5、結(jié)合藥劑學(xué)、天然藥物化學(xué)、藥理學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)、核醫(yī)學(xué)、衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)等學(xué)科的研究方法和技術(shù),運用正交法對因?qū)幤闹苿┕に囘M(jìn)行優(yōu)化,并且將考察因?qū)幤瑢卓宏幪撔∈蟮乃幚碜饔?。最終為因?qū)幤男滤幯邪l(fā)及臨床甲亢的治療提供實驗依據(jù)。
　　 目的:采用正交試驗設(shè)計法對因?qū)幤闹苿┕に囘M(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)選出因?qū)幤淖罴阎苿┕に嚄l件,為因?qū)幤男滤幯邪l(fā)提供試驗依據(jù)；利用甲狀腺素和利血平誘導(dǎo)建立小鼠甲亢陰虛征模型；觀察因?qū)幤瑢卓宏幪撔∈蟮乃幚碜饔?對各組

6、小鼠的外觀行為,攝食量及飲水量,體重,甲狀腺臟器系數(shù),肝臟臟器系數(shù),cAMP、cGMP水平,常壓耐缺氧時間,負(fù)重游泳時間,游泳后肝糖原含量變化情況進(jìn)行計算檢測和分析,為因?qū)幤男滤幯邪l(fā)及臨床甲亢的治療提供試驗依據(jù)。
　　 方法
　　 1.正交法優(yōu)選因?qū)幤闹苿┕に嚨难芯渴紫纫越嗟寐蕿橹笜?biāo)進(jìn)行預(yù)實驗對提取次數(shù)進(jìn)行考察,根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果選取加水量、煎煮時間、浸泡時間三個因素,每個因素選取3個水平,分別為:加水量(12、10、

7、8倍)；煎煮時間(3,3,3、3,2,2、3,2,1小時)；浸泡時間(1.5、1.0、0.5小時),以浸膏得率、黃芪甲苷含量、表-兒茶素含量為指標(biāo),采用正交試驗法對因?qū)幤闹苿┕に囘M(jìn)行優(yōu)化,通過直觀分析及方差分析優(yōu)選出最佳工藝,并對最優(yōu)制劑工藝進(jìn)行驗證試驗。黃芪甲苷及表-兒茶素的含量測定均采用高效液相色譜法。
　　 2.甲狀腺素和利血平誘導(dǎo)的小鼠甲亢陰虛證模型的制備昆明小鼠48只,♀♂各半,隨機(jī)分為4組,每組12只,第1組為空白

8、對照組,第2～4組為甲狀腺素和利血平混懸液低、中、高劑量組。空白對照組給予等體積的生理鹽水,其余各組分別ig給予75mg/kg甲狀腺素和0.5mg/kg利血平、150mg/kg甲狀腺素和1mg/kg利血平、300mg/kg甲狀腺素和2mg/kg利血平生理鹽水混懸液。1次/d,連續(xù)給藥7d。觀察造模后各組小鼠的外觀、行為、體重的變化,用放射免疫法和免疫放射法檢測各組小鼠血清T3、T4、FT3、FT4、TSH值,摘取小鼠甲狀腺、肝臟組織稱量

9、,計算臟器系數(shù)。
　　 3.因?qū)幤瑢卓宏幪撔∈蟮乃幚碜饔醚芯繉⒗ッ鞣N小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為6組,即空白對照組,模型對照組,陽性對照組(甲亢靈組),因?qū)幤?、中、高劑量組,每組10只,♀♂各半。除對照組給予等體積的生理鹽水外,其余組每日灌胃300mg/kg甲狀腺素混懸液及2mg/kg利血平,連續(xù)7d進(jìn)行甲亢陰虛型小鼠造模。第8d起每日給藥一次進(jìn)行治療,對照組及模型組給予等體積生理鹽水,甲亢靈組1.2g/kg甲亢靈片混懸液,因?qū)幤?/p>

10、、中、高劑量組分別給藥0.6g/kg、1.2g/kg、1.8g/kg的因?qū)幤鞈乙?相當(dāng)于臨床用藥劑量的10倍、20倍、30倍),連續(xù)30d。觀察各組小鼠外觀行為,攝食量及飲水量等一般情況,并于造模前,造模7d,治療30d后稱量各組小鼠體重。測定各組小鼠的甲狀腺臟器系數(shù),肝臟臟器系數(shù),cAMP、cGMP水平,常壓耐缺氧時間,負(fù)重游泳時間,游泳后肝糖原含量變化情況。
　　 結(jié)果
　　 1.正交法優(yōu)選因?qū)幤闹苿┕に嚨难芯款A(yù)

11、實驗結(jié)果表明:第3次提取的浸膏得率大于3次總量的10％,且第三次提取后除氨基酸未檢測出以外,皂苷類及鞣質(zhì)類仍能檢測出,結(jié)果較明顯。因此,確定提取次數(shù)為3次。正交試驗結(jié)果表明:A因素選擇A1水平即12倍加水量；B因素對浸膏得率影響不顯著,對黃芪甲苷含量和表-兒茶素含量影響顯著,考慮到后兩個評價指標(biāo)更為重要,所以B因素選擇B2水平或B3水平即三次的煎煮時間分別為3,2,2h和3,2,1h；C因素對浸膏得率影響不顯著,對黃芪甲苷含量和表-兒茶

12、素的含量雖然有顯著影響,但都不及B因素重要,所以考慮生產(chǎn)成本及生產(chǎn)時間,C因素選擇C2水平即浸泡時間為1.0h。僅需對B2和B3進(jìn)行進(jìn)一步的驗證。因此,根據(jù)正交試驗結(jié)果優(yōu)選出的因?qū)幤苿┕に嚨淖顑?yōu)條件為A1B3C1或A1B2C2,即提取時加水量為12倍,煎煮時間分別為3,2,2h和3,2,1h,浸泡時間為1.0h。
　　 經(jīng)過驗證試驗及重復(fù)試驗,本試驗研究最終確定了因?qū)幤苿┕に嚨淖顑?yōu)條件為:A1B2C2,即提取時加水量為藥材的

13、12倍,提取時間分別為3,2,2h,浸泡時間為1.0h,且此工藝條件合理穩(wěn)定可行。
　　 2.甲狀腺素和利血平誘導(dǎo)的小鼠甲亢陰虛證模型的制各本研究結(jié)果表明:通過灌服甲狀腺素和利血平混懸液的方法進(jìn)行造模,實驗結(jié)束后與空白對照組比較,第4組即甲狀腺素和利血平混懸液高劑量組小鼠T3、T4、FT3、FT4值顯著升高(P<0.05),且TSH值顯著降低(P<0.05),體重顯著減輕(P<0.05),甲狀腺、肝臟臟器系數(shù)均顯著增大(P<0.

14、05),具有中醫(yī)陰虛證的臨床表現(xiàn)如躁動不安、皮毛光澤度差、進(jìn)食量減少、飲水量減少等,說明本實驗制備的陰虛癥動物模型是成功的,其劑量選擇為甲狀腺素300mg/kg和2mg/kg利血平為宜。
　　 3.因?qū)幤瑢卓宏幪撔∈蟮乃幚碜饔醚芯勘狙芯拷Y(jié)果表明:通過灌服甲狀腺素和利血平混懸液的方法進(jìn)行造模,然后對甲亢陰虛小鼠進(jìn)行給藥30d治療后,與甲亢模型組比較,因?qū)幤汀⒅?、高組小鼠體重、cGMP水平、常壓耐缺氧時間、負(fù)重游泳時間、游泳后肝

15、糖原含量與模型組比較均顯著增加(P<0.05),甲狀腺臟器系數(shù)、肝臟臟器系數(shù)、cAMP水平及cAMP/cGMP比值則顯著下降(P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.通過正交試驗設(shè)計優(yōu)選出的因?qū)幤苿┕に嘇1B2C2(即提取時加水量為藥材的12倍,提取時間分別為3,2,2h,浸泡時間為1.0h)合理,穩(wěn)定,可行,且在保證藥品質(zhì)量的前提下,節(jié)約了能源,降低了生產(chǎn)成本,提高了經(jīng)濟(jì)效益。
　　 2.通過對小鼠各項指標(biāo)的