環(huán)境激素雙酚A對成年SD大鼠睪丸內(nèi)P450scc和3β-HSD蛋白表達的影響.pdf

1、目的:當前環(huán)境污染越來越重,環(huán)境對人類的傷害越來越厲害,尤其是大量化工材料的生產(chǎn)和使用使得環(huán)境污染以從未有過的高度被人類重視起來,因為這已經(jīng)深深危害到人類的健康甚至危害人類下一代,在大量的環(huán)境污染物質(zhì)中環(huán)境激素類物質(zhì)尤其引人關(guān)注,其中很重要的一種環(huán)境激素類污染物就是雙酚A,雙酚A存在于日常生活中隨處可見的塑料制品中,用途廣泛,自然環(huán)境中存在半衰期長,難降解,對人類健康影響大。近年來男性的生育能力越來越差,上世紀五六十年代男性精子密度是現(xiàn)

2、在男性精子密度的一倍,這種現(xiàn)象引起科學(xué)家的重視,經(jīng)過大量的研究分析發(fā)現(xiàn)環(huán)境污染是造成男性生育能力下降的主要因素之一。環(huán)境激素雙酚A對男性生育能力影響的研究成為了科學(xué)家研究的重點。
　　 本實驗就是研究環(huán)境激素雙酚A(bisphenol A,BPA)灌胃染毒雄性SD大鼠后對大鼠睪丸合成雄激素睪酮的影響,并探討給予大鼠灌胃雙酚A后對睪丸間質(zhì)細胞中睪酮合成關(guān)鍵酶P450sec(膽固醇側(cè)鏈裂解酶)和3β-HSD(3β-羥基類固醇脫氫酶)

3、蛋白表達的影響,在細胞蛋白水平研究雙酚A對雄性大鼠睪酮合成影響的機制,以期待能夠探明環(huán)境激素雙酚A影響雄性生育能力的具體機制,從而能夠從根源上預(yù)防和解決環(huán)境激素雙酚A對人類男性生育能力的影響。
　　 材料與方法:
　　 1.實驗動物及材料:實驗動物選取清潔級8周齡成年雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠,體重在180-200g。所有大鼠均分籠飼養(yǎng)于動物房一周后用于實驗,每日模擬自然采光12小時,均自由采食全價顆粒

4、飼料,飲用自來水,每天定時染毒,每周染毒5次,染毒8周后用于實驗。
　　 2.實驗動物分組及染毒方式:將四十八只大鼠隨機分為四組即對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組,每組12只。各個實驗組分別用玉米油配制成不同劑量濃度的BPA灌胃染毒,低劑量組給予2mg/kgBPA灌胃,中劑量組給予20mg/kgBPA灌胃,高劑量組給予200mg/kgBPA灌胃,對照組每日灌等量玉米油。
　　 3.實驗標本處理:染毒結(jié)束后大鼠稱重,然

5、后處死心臟取血,靜置后離心分離保存血清,應(yīng)用酶聯(lián)免疫方法檢測血清睪酮的濃度,取睪丸附睪進行稱重計算臟器系數(shù),睪丸中性甲醛固定,包埋切片行HE染色和免疫組化染色,對比分析染毒組和對照組差異,結(jié)果應(yīng)用SPSS軟件系統(tǒng)進行分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠日常活動變化:高劑量組染毒大鼠表現(xiàn)出如被毛雜亂、活動減少和軟便等中毒癥狀,同時體重增長緩慢。其余各組大鼠狀態(tài)正常未見明顯異?；顒印?br>　　 2.雙酚A染毒后體重及睪丸

6、變化:隨著BPA染毒劑量的增加,大鼠體重、睪丸臟器系數(shù)逐漸降低,染毒中、高劑量組與對照組相比各臟器指標均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),且大鼠體重、睪丸臟器系數(shù)與BPA染毒劑量相關(guān),染毒劑量越大增長越緩慢。
　　 3.大鼠血清睪酮的含量差別:低劑量組大鼠血清睪酮含量略高于對照組,但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義;中、高劑量染毒組睪酮含量低于對照組,隨染毒劑量增加而降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 4.睪丸組織結(jié)構(gòu)變化:對照組大鼠睪丸組織

7、結(jié)構(gòu)顯示睪丸發(fā)育良好,精細小管排列致密,精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞和精子細胞依次排列整齊,大量精子存在管腔內(nèi)。中、高劑量組睪丸發(fā)育差精細小管排列松散,間質(zhì)細胞稀疏,部分精細小管腔內(nèi)生殖細胞排列紊亂。低劑量組大鼠切片未見明顯異常。
　　 5. P450scc在大鼠睪丸間質(zhì)細胞上的表達:對照組與低劑量組的陽性間質(zhì)細胞數(shù)較多,細胞著色深,吸光度接近,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義;中、高劑量組P450scc的陽性細胞表達弱,染色淺,吸光

8、度變小,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 6.3βHSD在大鼠睪丸間質(zhì)細胞上的表達:3βHSD在中、高劑量組與對照組相比陽性細胞數(shù)目減少,染色顏色變淺,吸光度變小,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在對照組和低劑量染毒組之間沒有明顯差異,陽性細胞多、染色深。
　　 結(jié)論:經(jīng)口攝入環(huán)境激素雙酚A染毒雄性大鼠可以對雄性大鼠生殖系統(tǒng)產(chǎn)生毒害作用,攝入雙酚A達到一定濃度可以影響大鼠體重和睪丸重量變化,較高劑量會抑制睪丸產(chǎn)生睪酮,作用機制可能與抑制睪酮合