低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥對(duì)大鼠睪丸iNOS和OPN蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)采用大鼠喂服低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥(棉酚(G，Gossypol acetic acid)12.5mg/(kg·d)+去氧孕烯(DSG，Desogestrel)125μg/(kg·d)+炔雌醇(EE，Ethinyl estradiol)25μg/(kg·d)+十一酸睪丸酮(TU，Testosterone undecanoate)100mg/(kg·d))的方式，與單獨(dú)喂服相同劑量的棉酚或甾體激素的大鼠及喂服甲基纖維素溶劑的大鼠

2、相對(duì)照，通過(guò)TUNEL染色，觀察生精細(xì)胞凋亡的情況；通過(guò)免疫組織化學(xué)染色和免疫印跡，觀察誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達(dá)的變化，以期發(fā)現(xiàn)iNOS在生精細(xì)胞凋亡中的作用；通過(guò)免疫組織化學(xué)染色和免疫印跡，觀察骨橋蛋白(OPN)，這一細(xì)胞間連接分子的表達(dá)變化。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括兩部分：生精細(xì)胞凋亡和iNOS蛋白表達(dá)的變化，OPN表達(dá)的變化。 TUNEL染色顯示，在正常對(duì)照組(C組)，陽(yáng)性著色主要分布在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管

3、的殘余體中，偶見(jiàn)于粗線期精母細(xì)胞中。棉甾聯(lián)合用藥組(GH組)和激素組(H組)，陽(yáng)性著色主要分布在粗線期精母細(xì)胞中，隨用藥時(shí)間的延長(zhǎng)，陽(yáng)性著色的細(xì)胞數(shù)量增多(P<0.01)。免疫組織化學(xué)染色顯示，在正常對(duì)照組，iNOS在殘余體、精原細(xì)胞和粗線期精母細(xì)胞中的表達(dá)具有期依賴性。在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管，iNOS主要在殘余體中表達(dá)；在Ⅸ—Ⅻ期生精小管，精原細(xì)胞和粗線期精母細(xì)胞的核中可見(jiàn)少量表達(dá)。在棉甾聯(lián)合用藥組，iNOS在殘余體中的表達(dá)，隨用藥時(shí)

4、間的延長(zhǎng)表達(dá)量降低(P<0.05)；iNOS在粗線期精母細(xì)胞、精原細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞核中的表達(dá)，隨用藥時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量增高(P<0.05)。iNOS在正常對(duì)照組的間質(zhì)細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)，棉甾聯(lián)合用藥組4周降至最低，4，6和8周表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。本試驗(yàn)提示：iNOS蛋白在低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合應(yīng)用大鼠睪丸中各部位的表達(dá)變化趨勢(shì)不一致，分別產(chǎn)生不同的功能；凋亡的生精細(xì)胞數(shù)量增加，可能與iNOS的表達(dá)增多有關(guān)。 免疫組織化學(xué)染色顯示，在正常

5、對(duì)照組，OPN陽(yáng)性著色主要分布在間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，強(qiáng)表達(dá)；在基底部細(xì)胞連接處，精原細(xì)胞、前細(xì)線期精母細(xì)胞、細(xì)線期精母細(xì)胞、支持細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)、精子細(xì)胞項(xiàng)體部、各級(jí)生殖細(xì)胞與支持細(xì)胞連接處，都有表達(dá)。棉酚組(G組)OPN的表達(dá)與對(duì)照組相似。棉甾聯(lián)合用藥和激素組中，OPN的表達(dá)變化趨勢(shì)相似，表達(dá)位置與對(duì)照組同。OPN在間質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)，隨用藥時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量降低(P<0.05)；在基底細(xì)胞連接處的表達(dá)隨用藥時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量增強(qiáng)；在各級(jí)生精

6、細(xì)胞與支持細(xì)胞連接處的表達(dá)，隨用藥時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量呈先增高后降低的趨勢(shì)。免疫印跡的結(jié)果顯示，對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)OPN的表達(dá)量基本一致，棉酚組OPN蛋白表達(dá)與對(duì)照組相似。激素組和棉甾聯(lián)合用藥組表達(dá)量呈增強(qiáng)趨勢(shì)，特別是棉甾聯(lián)合用藥組，在4、6周時(shí)表達(dá)量很低，8周較前增強(qiáng)明顯。 綜上所述，棉甾聯(lián)合用藥抗生育過(guò)程中會(huì)引起生精細(xì)胞凋亡增多，可能與iNOS蛋白表達(dá)的增多有關(guān)。OPN作為一種細(xì)胞外連接分子，隨用藥時(shí)間的延長(zhǎng)，在其底部細(xì)胞連接處表達(dá)