減毒活疫苗D39ΔCPS-TA對(duì)小鼠感染肺炎鏈球菌的保護(hù)效果和機(jī)制研究.pdf

1、目的：肺炎鏈球菌是一種常見革蘭陽(yáng)性致病菌,可引起肺炎、腦膜炎、敗血癥、鼻竇炎及中耳炎等疾病。由于抗生素的濫用,已經(jīng)出現(xiàn)了耐萬(wàn)古霉素和多重耐藥性的肺炎鏈球菌菌株。世界衛(wèi)生組織建議將肺炎鏈球菌結(jié)合疫苗納入國(guó)家免疫計(jì)劃,并將S.pn疫苗列為全球最急需的前3位疫苗之一。目前已上市的23價(jià)莢膜多糖疫苗和7-13價(jià)的莢膜多糖結(jié)合疫苗由于存在莢膜轉(zhuǎn)換、成本高昂等種種不足,限制了它們的推廣使用。因此開發(fā)新型肺炎鏈球菌疫苗迫在眉睫。減毒活菌疫苗是一種免疫

2、原性強(qiáng)、保護(hù)效果好、成本低廉的疫苗。由于通過(guò)傳統(tǒng)方法不易獲得減毒菌株,因此其開發(fā)有一定的困難。本課題組在基因突變實(shí)驗(yàn)中偶然獲得了一株莢膜丟失的菌株,前期研究顯示其較肺炎鏈球菌無(wú)感染致病能力的R6菌株的毒力還弱,因此安全性較高,有望開發(fā)成一種減毒活菌疫苗。本研究在全面鑒定其安全性的基礎(chǔ)上,對(duì)其保護(hù)作用進(jìn)行評(píng)價(jià),并進(jìn)行初步的分子機(jī)制研究,為該活菌疫苗的研發(fā)提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：通過(guò)莢膜檢測(cè)、莢膜磷壁酸檢測(cè)、溶血活性檢測(cè)、

3、小鼠體內(nèi)毒力實(shí)驗(yàn)、肺組織病理切片觀察及缺陷菌在小鼠體內(nèi)定植來(lái)評(píng)價(jià)D39△CPS-TA的安全性;候選疫苗免疫小鼠后,通過(guò)檢測(cè)特異性抗體效價(jià)、疫苗對(duì)定植的保護(hù)效果、疫苗對(duì)肺炎和敗血癥的保護(hù)效果、疫苗對(duì)臨床菌株的保護(hù)效果及疫苗的長(zhǎng)期保護(hù)效果來(lái)評(píng)價(jià)D39△CPS-TA的有效性;最后通過(guò)檢測(cè)抗體亞型、抗體的被動(dòng)保護(hù)效果及細(xì)胞因子的檢測(cè)來(lái)初步探討D39△CPS-TA的保護(hù)機(jī)制。
　　 結(jié)果：D39△ACP-TA作為減毒活菌疫苗安全性較好。與

4、D39相比,D39△CPS-TA的莢膜明顯變薄變稀;莢膜磷壁酸的表達(dá)量顯著減少;溶血活性也顯著降低;毒力明顯減弱;對(duì)小鼠肺組織只引起輕微的可耐受的炎癥,損傷較輕;在小鼠體內(nèi)的定植能力也明顯減弱,24小時(shí)后完全被清除。減毒活菌疫苗D39△CPS-TA的保護(hù)效果很好。免疫小鼠后,D39△CPS-TA可以誘導(dǎo)高效價(jià)的特異性抗體;也能減少肺炎鏈球菌19F和TIGR4在小鼠體內(nèi)的定植;可以對(duì)D39引起的肺炎和敗血癥產(chǎn)生很好的保護(hù)效果,特別是粘膜免

5、疫的保護(hù)效果達(dá)100％:對(duì)臨床菌株6B和3型感染的保護(hù)效果也較市面疫苗好(p＜0.05);粘膜免疫對(duì)小鼠長(zhǎng)期保護(hù)效果為100%,系統(tǒng)免疫的保護(hù)效果為75%。抗體的被動(dòng)保護(hù)效果為100%;其抗體亞型主要為IgG1、IgG2a、IgG2b;D39△CPS-TA系統(tǒng)免疫產(chǎn)生高水平的IL-10,而粘膜免疫產(chǎn)生高水平的IL-10、IL-17A和IFN-γ。
　　 結(jié)論：D39△CPS-TA作為減毒活菌疫苗安全性較高。它對(duì)小鼠的保護(hù)效果非常