HDL上調(diào)破骨細胞ABCG1表達從而影響破骨細胞生成并促進其凋亡.pdf

1、目的：膽固醇是細胞膜的主要組成部分，在破骨細胞的形成及生存中發(fā)揮重要作用。破骨細胞本身幾乎不合成膽固醇，因此細胞內(nèi)膽固醇容易失衡而影響破骨細胞形成或生存。研究發(fā)現(xiàn)HDL水平升高可促進破骨細胞膽固醇流出并促進其凋亡，但其促進膽固醇流出的機制及對破骨細胞形成的影響尚不清楚。本研究選取RAW264.7單核/巨噬細胞作為破骨前體細胞，以RANKL及M-CSF誘導其形成的破骨細胞為研究對象，探討HDL促進破骨細胞膽固醇流出的機制及對其形成和生存的

2、影響。
　　方法：用含HDL的培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細胞，加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨細胞，在不同的時間觀察TRAP陽性的多核細胞的數(shù)目、大小和核固縮情況；用含不同濃度的HDL的培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細胞，加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨細胞，液體閃爍計數(shù)儀檢測其膽固醇流出情況；用含HDL的培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細胞不同時間，加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨細胞，液體閃爍計數(shù)儀檢

3、測其膽固醇流出情況。HDL3、HDL2、AopA1處理破骨細胞，觀察其膽固醇流出情況及TRAP陽性的多核細胞的數(shù)目、大小和核固縮情況。用含HDL的培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細胞3天， 加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨細胞，熒光定量PCR檢測破骨細胞ABCG1、SR-B1mRNA的表達，Western blot檢測ABCG1、SR-B1、Cav1蛋白表達。siRNA沉默ABCG1表達，觀察其膽固醇流出情況及TRAP+

4、的多核細胞的數(shù)目。
　　結果：1）HDL處理細胞后，形成的破骨細胞最大直徑減小，融合指數(shù)減小，核固縮的破骨細胞增多；2）HDL促進破骨細胞膽固醇流出，且呈濃度及時間依賴性，細胞內(nèi)游離膽固醇明顯減少;3）不同的HDL亞型促進破骨細胞膽固醇流出的能力不同，以HDL3能力最強;4）HDL處理使破骨細胞表達ABCG1增多而SR-B1減少;5）ABCG1 siRNA處理使HDL促進破骨細胞膽固醇流出的能力下降，破骨細胞形成恢復，凋亡減少;6