21三體綜合征21qCpG島DNA甲基化水平研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1三體綜合征是由于21號(hào)染色體不分離所導(dǎo)致的一種染色體病，表現(xiàn)為嚴(yán)重的智力發(fā)育障礙和多發(fā)性先天畸形，是臨床最常見的嚴(yán)重出生缺陷之一，由于該病缺乏有效的治療手段，給社會(huì)、家庭帶來異常沉重的負(fù)擔(dān)，因而進(jìn)行孕早期篩查和產(chǎn)前染色體診斷是降低其發(fā)生率的有效途徑。但目前仍未見21三體患者CpG島DNA甲基化狀態(tài)的相關(guān)報(bào)道，因此，研究21三體患者CpG島甲基化狀態(tài)，這對(duì)探索更有效、更特異的用于21三體產(chǎn)前風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的表觀遺傳學(xué)分子靶點(diǎn)具有重

2、要的科學(xué)意義和臨床實(shí)踐價(jià)值。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：運(yùn)用HpaⅡ-McrBC PCR(HM-PCR)方法篩檢分析21qCpG島甲基化狀態(tài)。首先從UCSC數(shù)據(jù)庫(kù)獲得21qCpG島DNA序列，并與華大基因炎黃數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，驗(yàn)證序列和引物。然后建立HM-PCR檢測(cè)方法，并利用HM-PCR技術(shù)篩查和分析了150例21三體患者21q上2690個(gè)CpG島，并將患者CpG島甲基化狀態(tài)與正常個(gè)體進(jìn)行比較。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：本研究首先驗(yàn)證了149

3、個(gè)CpG島的DNA序列和148對(duì)CpG島引物的準(zhǔn)確性，明確序列和引物在中國(guó)漢族人群運(yùn)用的可行性。建立了簡(jiǎn)化的HM-PCR方法。HM-PCR篩查發(fā)現(xiàn)21三體患者21號(hào)染色體長(zhǎng)臂的CpG島中，98個(gè)無甲基化，30個(gè)完全甲基化，12個(gè)雜合甲基化，8個(gè)不完全甲基化，在健康個(gè)體21號(hào)染色體長(zhǎng)臂的148個(gè)CpG島中也得到完全相同結(jié)果。有4個(gè)雜合甲基化CpG島(編號(hào)：11，15，27，71)與日本人存在差異，日本人群呈現(xiàn)出無甲基化狀態(tài)；有1個(gè)雜合甲基

4、化CpG島(編號(hào)：93)與日本人不一致，日本人群呈現(xiàn)出完全甲基化狀態(tài)。這種差異是否是種族之間的差異，尚需對(duì)這5個(gè)CpG島進(jìn)行重亞硫酸鹽測(cè)序確認(rèn)。第103號(hào)CpG島沒有HpaⅡ和HhaⅠ酶切位點(diǎn)，因此，需要利用重亞硫酸鹽測(cè)序檢測(cè)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論：21三體患者與健康個(gè)體之間在21qCpG島上不存在DNA甲基化狀態(tài)的差異；21qCpG島DNA甲基化狀態(tài)在同一種族內(nèi)高度一致，那么21qCpG島DNA甲基化狀態(tài)可否為種族間識(shí)別的表觀遺傳