屎腸球菌PDF抑制劑的篩選及活性菌株的鑒定：I04-4776、I04-5195等生物活性菌株的多項(xiàng)分類(lèi)研究.pdf

1、肽脫甲酰基酶(peptide deformylase，PDF)是微生物生長(zhǎng)、繁殖的關(guān)鍵酶，肽脫甲?；敢种苿┚哂袕V譜、不易產(chǎn)生耐藥性、與現(xiàn)有的抗菌素不發(fā)生交叉耐藥和選擇性毒性好等優(yōu)點(diǎn)，因此，Dan Ferbe等在發(fā)表于2002年2月Science上的一篇文章中，將PDF視為新一代廣譜抗生素篩選最理想的分子靶點(diǎn)之一。 本室唐先兵博士已完成以屎腸球菌PDF為靶點(diǎn)的高通量篩選模型的構(gòu)建，但尚未深入篩選。本研究對(duì)該模型進(jìn)行了恢復(fù)，并應(yīng)用

2、屎腸球菌E.faecium (ATCC19434)為初篩模型，PDF酶為二篩模型，開(kāi)展了PDF酶抑制劑的規(guī)?；Y選。從20261個(gè)微生物發(fā)酵樣品中，挑選出6株活性較強(qiáng)且穩(wěn)定的菌株，測(cè)定了它們的抗菌譜。菌株03-723和03-8772的抗菌譜十分引人注意，對(duì)所有耐藥菌包括MRSA、MRSE和VREF都呈現(xiàn)抗菌活性，而且對(duì)PDF酶也有抑制作用。因此，本研究對(duì)這兩株菌進(jìn)行了鑒定，研究結(jié)果表明：這兩株菌屬于游動(dòng)放線菌屬的兩個(gè)新種。其抗耐藥菌的活

3、性成分值得深入研究。 為擴(kuò)大篩選范圍，本研究還對(duì)13株紅樹(shù)林植物樣品和2株藥用植物樣品進(jìn)行了內(nèi)生放線菌的分離，共分離出103株植物內(nèi)生放線菌。經(jīng)過(guò)表觀形態(tài)比較、選取部分代表菌株進(jìn)行16S rRNA基因的系統(tǒng)發(fā)育研究。研究結(jié)果表明，這103株分離株分布于放線菌目中的五個(gè)屬：鏈霉菌屬(Streptomyces)、小單孢菌屬(Micromonospora)、諾卡氏菌屬(Nocardia)、倫茨氏菌屬(Lentzea)和糖絲菌屬(Sac

4、charothrix)。其中鏈霉菌占大多數(shù)，倫茨氏菌屬(Lentzea)和糖絲菌屬(Saccharothrix)菌株是本研究首次從植物中分離得到的。有8株放線菌與已知模式菌的相似性比較低，其中有3株低于98.5％，這些菌株可能代表了鏈霉菌屬、倫茨氏菌屬、糖絲菌屬內(nèi)未知的分類(lèi)單元，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。這103株分離菌經(jīng)過(guò)PDF酶篩選獲得2株酶抑制陽(yáng)性放線菌：I07-01838和I08-00453。經(jīng)鑒別，菌株I07-01838為碳樣小單孢菌(

5、Micromonospora carbonacea)，菌株I08-00453為一株稀有放線菌。本論文首次從植物內(nèi)生菌中分離得到碳樣小單孢菌，并首次發(fā)現(xiàn)碳樣小單孢菌屬菌株產(chǎn)生PDF酶抑制劑。 本研究還對(duì)近年來(lái)本所新藥篩選重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室篩選得到的幾株活性菌株進(jìn)行了“種”水平的鑒定，其中，利用人高密度脂蛋白受體CLA-1表達(dá)上調(diào)劑篩選模型篩選得到的陽(yáng)性菌株I04-4776被鑒定為鏈霉菌屬的一個(gè)新種，命名為Streptomyces emei

6、ensis，文章已發(fā)表在USEM上，活性成分4776B(4'-甲氧基-3'，5,7-三羥基異黃酮)為首次從微生物代謝產(chǎn)物中獲得；該模型篩得的另一個(gè)陽(yáng)性菌株I04-5486與Streptomyces kunmingensis同種；以骨形態(tài)形成蛋白因子Ⅱ (BMP-2)為靶點(diǎn)的抗骨質(zhì)疏松篩選模型篩得的BMP-2表達(dá)上調(diào)劑04-5195的產(chǎn)生菌104-5195被鑒定為諾卡菌屬的一個(gè)新種，命名為Nocardia jinanensis。文