超聲微泡造影劑聯(lián)合脂質(zhì)體介導(dǎo)pNogo-R shRNA轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分
　　 超聲微泡介導(dǎo)pGPU6/Neo質(zhì)粒轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞參數(shù)優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:探討超聲微泡介導(dǎo)pGPU6/Neo質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠NSCs的最優(yōu)參數(shù)。
　　 方法:以一定能量的超聲介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠NSCs,分為:空白組、pGPU6/Neo質(zhì)粒組、pGPU6/Neo質(zhì)粒+微泡組、pGPU6/Neo質(zhì)粒+超聲組、pGPU6/Neo質(zhì)粒+微泡+超聲組,并按不同轉(zhuǎn)染條件分為亞組。轉(zhuǎn)染48h后熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染

2、效率,臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞活性。
　　 結(jié)果:最優(yōu)參數(shù)為聲強(qiáng)1.0W/cm2,輻照時(shí)間30s時(shí),超聲微泡介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染率最高,且對(duì)細(xì)胞活性無明顯影響。超聲微泡介導(dǎo)質(zhì)粒對(duì)NSCs的轉(zhuǎn)染效率,明顯高于其他實(shí)驗(yàn)組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:在超聲聲強(qiáng)為1.0W/cm2,輻照時(shí)間30s的條件下,超聲微泡造影劑能夠安全、有效地介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染NSCs。
　　 第二部分
　　 超聲微泡造影劑聯(lián)合脂質(zhì)體介導(dǎo)pNogo-R

3、 shRNA轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:探討超聲微泡介導(dǎo)pNogo-R shRNA轉(zhuǎn)染大鼠NSCs的有效率及可行性,同時(shí)評(píng)估UMMD聯(lián)合脂質(zhì)體提高基因轉(zhuǎn)染效率的協(xié)同作用。
　　 方法:NSCs自清潔級(jí)SD新生大鼠分離獲得,以不同的方式轉(zhuǎn)染培養(yǎng)至第三代的NSCs,分為:A.空白組、B.陰性質(zhì)粒+超聲微泡組、C.pNogo-R shRNA質(zhì)粒+超聲微泡組、D.pNogo-R shRNA質(zhì)粒+脂質(zhì)體組、E.pNogo

4、-R shRNA質(zhì)粒+超聲微泡+脂質(zhì)體組。
　　 結(jié)果:熒光顯微鏡觀測(cè)結(jié)果顯示,E組轉(zhuǎn)染效率明顯高于其他實(shí)驗(yàn)組,而C組與D組間無顯著差異;同時(shí),臺(tái)盼藍(lán)染色法顯示,與其他組相比較,超聲微泡聯(lián)合脂質(zhì)體組對(duì)細(xì)胞活性影響無顯著差異;轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,E組Nogo-R的蛋白及mRNA表達(dá)水平明顯低于其他組別(P＜0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:本研究結(jié)果表明,超聲微泡聯(lián)合脂質(zhì)體的基因轉(zhuǎn)染為一非侵襲性轉(zhuǎn)染方法,對(duì)細(xì)胞活性