診斷超聲結(jié)合自制微泡造影劑助溶血栓的實驗研究.pdf

1、隨著超聲微泡造影劑技術(shù)的不斷發(fā)展，其在臨床上的應用價值不僅僅體現(xiàn)在單純的造影顯像方面，其在治療領(lǐng)域的研究仍受到了很多的關(guān)注如靶向基因轉(zhuǎn)染和藥物的傳輸、輔助溶栓、突破生物學屏障等。超聲的空化過程可以把聲場能量高度集中于極小的空化泡內(nèi)，并在空化泡破裂瞬間產(chǎn)生高溫、高熱、高壓等物理和化學效應，將其周圍的組織細胞嚴重破壞。微泡造影劑可以增加體內(nèi)的空化核數(shù)量，在超聲同樣的空化過程下，發(fā)生爆破破裂，其形成的沖擊波可增強超聲空化效應對其周圍組織的破壞

2、。由于血栓結(jié)構(gòu)本身缺乏正常的膠原纖維和彈力纖維，質(zhì)地堅硬易碎，彈性極限小，容易被分裂和崩解。以往研究報道中，微泡造影劑與超聲聯(lián)合作用，微泡在超聲的空化作用下可以破壞血凝塊結(jié)構(gòu)，增強溶栓療效。 在以往超聲聯(lián)合微泡造影劑增強血栓溶解的研究中，超聲頻率及能量采用的是低頻率(<1MHz)高能量(≥0.1W/c㎡)的治療超聲。本實驗采用診斷超聲無論其頻率(≥1MHz)及能量(<0.1W/c㎡)均低于治療超聲，旨在研究微泡造影劑在診斷超聲的

3、照射下是否仍具有增強血栓溶解的作用。 材料與方法： 一、研究對象 1、健康成人全血0.5 ml為l份，共27份，分為9組，置于1.5 ml塑料試管中，在37℃的水浴箱中放置5～6 h，制成血凝塊。 2、成年健康家兔32只(由中國醫(yī)科大學實驗中心提供)，雌雄不拘，體質(zhì)量2.5～3.0kg，平均(2.75±0.86) kg。均制作為兔右股靜脈血栓模型。 二實驗方法 1、微泡的制備應用國產(chǎn)新芝J

4、Y92—Ⅱ型超聲破細胞粉碎儀，5％的人血白蛋白與右旋糖酐40％混合液5 ml連于三通管，勻速注入全氟丙烷，聲振溶液密封備用，造影劑呈乳白色，顯微鏡下觀察微泡大小3～7μm，并計數(shù)。 2、利用統(tǒng)計學L9(34)正交表確定不同超聲頻率(1.8MHz、5MHz、11 MHz)、機械指數(shù)(0.5、1.2、1.6)、照射時間(10 min、30 min、60 min)、微泡濃度(3.5×109/ml、4.2×109/ml、5.0×109/

5、ml)四個不同參數(shù)及不同水平的分組，并進行體外的超聲照射，將照射后的血凝塊，進行生理鹽水沖洗、濾紙吸干，稱重(W1)，計算各組間的溶栓率P=[(W0-W1)/W0]×100％。 3、對溶栓后血栓塊進行切片HE染色，并在顯微鏡及掃描電鏡下觀察血栓內(nèi)部結(jié)構(gòu)。 4、32只健康家兔建立右股靜脈血栓模型并分為四組：單純尿激酶組；超聲+微泡造影劑組；超聲+微泡造影劑+尿激酶組；陽性對照組。 5、根據(jù)前期體外實驗所確定的最佳參

6、數(shù)組合，聯(lián)合尿激酶進行溶栓。溶栓過程中，利用彩色多普勒超聲技術(shù)及超聲背向散射積分技術(shù)對各組的血管再通情況及管腔內(nèi)回聲進行評價及測量，比較各組溶栓療效。 6、取溶栓治療后的兔右股靜脈，甲醛固定，行免疫組化染色，觀察各組管腔內(nèi)部結(jié)構(gòu)。 結(jié)果： 1、通過對L9(34)正交表方差分析，四種不同參數(shù)都具有統(tǒng)計學意義。并總結(jié)出提高溶栓率的最佳配合為超聲頻率A=1.8 MHz、機械指數(shù)B=1.6、作用時間C=60 min、微泡

7、濃度D=5.0×109/ml。 2、HE切片染色觀察溶栓前血凝塊內(nèi)紅細胞分布均勻，致密，無明顯空隙；溶栓后的血凝塊內(nèi)部結(jié)構(gòu)松散，紅細胞分散減少，細胞之間出現(xiàn)空隙。 3、掃描電鏡1000倍下觀察溶栓前血凝塊內(nèi)部血細胞與纖維素均勻分布；溶栓后血凝塊內(nèi)部纖維素斷裂，紅細胞之間出現(xiàn)空洞。 4、彩色多普勒在治療前顯示各組建模段股靜脈完全梗阻，無彩色血流顯示。尿激酶組、超聲+微泡組溶栓后，兔股靜脈內(nèi)血流再通情況相似，均可見一

8、不連續(xù)血流束貼近血管邊緣走行；超聲+微泡+尿激酶組溶栓后管腔內(nèi)血栓大部分溶解，管腔幾乎全部融通。 5、尿激酶組溶栓后：有7例再通，有3例評分為Ⅱ級；4例評分為Ⅰ級；超聲+微泡組溶栓后：7例再通，有2例評分為Ⅱ級；5例評分Ⅰ級；超聲+微泡+尿激酶組溶栓后：8例全部再通，其中有2例評分為Ⅲ級，6例評分為Ⅳ級。 6、超聲+微泡+尿激酶組治療后血流束寬度與管腔直徑比值、血流束橫截面積與管腔橫截面積的比值較尿激酶組、超聲+微泡組增

9、加(P<0.01)。尿激酶組與超聲+微泡組二組間無統(tǒng)學差異。 7、溶栓后尿激酶組管腔內(nèi)回聲IBS％值0.65±0.02，超聲+微泡組管腔內(nèi)回聲IBS％值0.64±0.04，超聲+微泡+尿激酶組管腔內(nèi)回聲IBS％值0.34±0.08較對照組0.89±0.06減小(P<0.01)；超聲+微泡+尿激酶組較尿激酶組、超聲+微泡組減少(P<0.01)；尿激酶組、超聲+微泡組間無統(tǒng)計學差異。 8、免疫組化染色結(jié)果顯示：尿激酶組溶栓后

10、兔股靜脈管腔仍可見大量血栓；僅是血栓中部出現(xiàn)管腔；超聲+微泡+尿激酶組溶栓后兔股靜脈腔內(nèi)血栓結(jié)構(gòu)溶解，重新出現(xiàn)靜脈管腔，僅存有殘留少量附壁血栓。 結(jié)論： 1、在體外實驗中，診斷超聲結(jié)合微泡造影劑具有明確的溶栓效應。 2、診斷超聲結(jié)合微泡造影劑溶栓的最佳操作條件組合是超聲頻率1.8MHz、機械指數(shù)1.6、作用時間60 min、微泡濃度5.0×109/ml。 3、在實驗兔體內(nèi)研究中，診斷超聲結(jié)合微泡造影劑仍具