抑乳調(diào)經(jīng)顆粒的質(zhì)量標準與藥效學(xué)研究.pdf

1、研究背景:高泌乳素血癥(Hyperprolacfinemia,HPRL)是一種婦科多發(fā)病,是下丘腦-垂體-性軸功能失調(diào)引起的一種內(nèi)分泌疾病,可使女性閉經(jīng)、月經(jīng)失調(diào)、不孕、生殖功能下降,以血液中血清泌乳素升高為主要臨床表現(xiàn)。近年來隨著血液放射免疫檢查(blood radioimmunoassay,RIA)的應(yīng)用和普及,本病的臨床診斷率顯著提高,醫(yī)藥工作者越來越重視這個疾病。HPRL不但使乳腺泌乳,而且具有抑制生育和破壞性腺功能的作用。過量

2、的PRL對下丘腦可形成反饋并抑制促性腺激素釋放激素的釋放。抑制垂體促卵泡生成素(FSH)、黃體生成素(LH)的分泌,使之分泌減少或者喪失分泌節(jié)律,月經(jīng)中期不能出現(xiàn)分泌FSH、LH高峰。另外,HPRL可抑制卵巢顆粒細胞生成孕酮(P)的功能,還抑制LH受體的誘惑、抑制卵巢對FSH和LH反應(yīng)能力,導(dǎo)致出現(xiàn)低雌激素狀態(tài)。當血中PRL過高時,輕者使FSH分泌不足,導(dǎo)致卵巢中濾泡發(fā)育不全,排卵后顆粒細胞數(shù)目變少,分泌孕酮量減少,從而出現(xiàn)黃體功能不健

3、全,嚴重者其排卵能力可完全喪失。
　　 麥角生物堿溴隱亭(Bromocriptine)是目前國內(nèi)治療HPRL的首選藥物,多為進口。但12％的患者由于溴隱亭的副作用而不能耐受有效治療量。該藥的副反應(yīng)主要是胃腸道反應(yīng),劑量較大時可有眩暈、體位性低血壓、頭痛、瞌睡與便秘等反應(yīng),患者常常難以堅持服用。中藥具有安全、副作用小、費用不高等優(yōu)點,在治療HPRL的應(yīng)用上已有多年的基礎(chǔ)和臨床研究,并逐漸受到重視。越來越多的文獻報道了中藥在治療HP

4、RL中發(fā)揮的積極作用。
　　 抑乳調(diào)經(jīng)顆粒(yiru tiaojing granule,YTG)是我院藥學(xué)部以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo),依據(jù)HPPL腎虛為本,肝郁為標的中醫(yī)病機,以及現(xiàn)代發(fā)病機理,在大量動物實驗基礎(chǔ)上,按中醫(yī)的辯證及理法組方,以現(xiàn)代藥劑技術(shù)制成顆粒劑,主要用于治療高泌乳素血癥。臨床研究表明:本品對HPRL的治療有效率達94.7％,尤其對肝郁腎虛型HPRL有滿意的臨床療效。
　　 目的:考察YTG的質(zhì)量標準及藥效學(xué)

5、評價,主要進行以下實驗:
　　 1.薄層色譜鑒別:考察YTG中主要成分仙茅、白芍、甘草的薄層色譜鑒別。
　　 2.含量測定:YTG中主要成分仙茅和白芍的含量測定。
　　 3.急性毒性試驗:觀察小鼠對YTG的急性毒性反應(yīng)。
　　 4.藥效學(xué)評價:研究YTG對實驗性高泌乳素血癥大鼠和摘除卵巢大鼠的防治效果。
　　 方法
　　 1.采用薄層色譜法(TLC法)對 YTG中的仙茅、白芍進行鑒別。

6、r>　　 2.YTG主要成分的含量測定
　　 2.1.YTG中仙茅苷含量測定色譜條件為:流動相:0.1％磷酸溶液:乙腈=79:21；檢測波長283nm；流速:1mL/min；色譜柱:美國迪馬公司的鉆石色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)；柱溫:40℃。在此條件下進行線性范圍考察、陰性對照試驗、精密度實試驗、回收率試驗、穩(wěn)定性試驗與YTG樣品測定。
　　 2.2.YTG中芍藥苷含量測定流動相:乙腈:0.1％磷酸溶液=

7、14:86:檢測波長220nm；流速:0.8mL/min；色譜柱:美國迪馬公司鉆石色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)；柱溫:室溫。在此條件下進行線性范圍考察、陰性對照試驗、精密度實試驗、回收率試驗、穩(wěn)定性試驗與YTG樣品測定。
　　 3.YTG的急性毒性實驗研究雌性小鼠單次灌胃給藥進行急性毒性預(yù)實驗,觀察一般狀況和死亡情況,無死亡,則不能求出半數(shù)致死量,采用1天內(nèi)最大濃度和最大體積的藥量灌胃,連續(xù)觀察14天,測其最大耐受給

8、藥劑量。
　　 4.YTG對HPRL模型和卵巢摘除模型的藥效研究
　　 4.1 YTG對實驗性HPRL大鼠模型的作用。用多巴胺受體阻斷劑鹽酸甲氧氯普胺注射液連續(xù)腹腔給藥造成大鼠HPRL模型,觀察抑乳調(diào)經(jīng)顆粒高、中、低劑量組,甲磺酸溴隱亭片陽性對照組、HPRL大鼠模型組、正常對照組的大鼠血清中泌乳素(PRL)、黃體生成素(LH)、孕酮(P)、雌二醇(E2)、睪酮(T)、促卵泡生成素(FSH)的激素水平以及對脾臟、卵巢的臟器

9、系數(shù)的影響。
　　 4.2.抑乳調(diào)經(jīng)顆粒治療卵巢功能早衰(POF)的療效和機理。采用卵巢摘除方法來制作卵巢早衰模型,觀察抑乳調(diào)經(jīng)顆粒對卵巢摘除大鼠臟器指數(shù)、雌二醇含量等的影響。
　　 結(jié)果
　　 1.薄層色譜上均能鑒別出仙茅、白芍、甘草,且陰性無干擾。
　　 2.YTG主要成分的含量測定以各對照品溶液的濃度(μg/mL)為縱坐標x,峰面積為縱坐標Y作直線回歸,得標準回歸方程:Y=11656X+4540.8

10、,R2=1.0000表明仙茅苷的進樣量在0.023～3.0μg范圍內(nèi)樣品濃度與其峰面積呈良好的線性關(guān)系；芍藥苷標準回歸方程:Y=13898X+14978,R2=0.9997表明芍藥苷苷的進樣量在0.0553-7.080μg范圍內(nèi)樣品濃度與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。采用的色譜方法不受其它組分的干擾,精密度、回收率、穩(wěn)定性良好,線性范圍可滿足測定的需要。
　　 3.抑乳調(diào)經(jīng)顆粒對小鼠的最大給藥劑量為64.4g/kg/d,相當于成人每

11、日口服劑量的199.2倍,在觀察期內(nèi),未見小鼠死亡。
　　 4.藥效學(xué)研究
　　 4.1.YTG對實驗性HPRL大鼠模型的作用YTG高、中、低劑量均可以顯著降低HPRL模型大鼠血清中泌乳素(PRL)(P<0.001)水平；臟器系數(shù)顯示YTG能夠保持臟器的正常質(zhì)量,維持各臟器的正常生理功能。
　　 4.2.YTG治療卵巢功能早衰(POF)的的療效YTG可增加卵巢摘除大鼠子宮和腎上腺的重量,防止子宮和腎上腺的萎縮；使

12、卵巢摘除大鼠陰道角化上皮細胞增多,增強雌激素活性,提高血中雌二醇水平。
　　 結(jié)論
　　 1.薄層色譜專屬性強,操作簡便,重現(xiàn)性好,可用于YTG的鑒別。
　　 2.采用的高效液相色譜方法不受其它組分的干擾,精密度、回收率、穩(wěn)定性良好,線性范圍可滿足測定的需要。
　　 3.YTG對雌性小鼠急性毒性實驗表明:該藥安全性高,未見不良反應(yīng)。試驗所獲得的最大耐受量為本品藥理學(xué)、藥效學(xué)等的研究提供了依據(jù)。