轉(zhuǎn)錄因子Nrf2在失血性休克中的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　失血性休克(Hemorrhagic shock，HS)中組織缺血產(chǎn)生的過多活性氧簇(ROS)在介導(dǎo)細(xì)胞損害以及繼而發(fā)生的全身炎癥反應(yīng)綜合征和多器官功能不全綜合征中扮演著至關(guān)重要的角色。但是目前臨床上對如何去除多余ROS，防止失血性休克的繼發(fā)器官損害仍缺乏有效手段。NF-E2相關(guān)因子2(NF-E2-related factor2，Nrf2)已被發(fā)現(xiàn)是機(jī)體重要的抗氧化應(yīng)激的轉(zhuǎn)錄因子。本課題意在探討Nrf2在失血性休克中的保

2、護(hù)作用及機(jī)制，為臨床上失血性休克的治療提供一個(gè)新的靶點(diǎn)及其理論依據(jù)。
　　方法：
　　通過雙側(cè)股動(dòng)脈和一側(cè)股靜脈置管制作Nrf2基因敲除小鼠的失血性休克模型，研究Nrf2缺失對失血性休克小鼠的全身性炎癥反應(yīng)，重要臟器的炎癥浸潤和細(xì)胞損害的影響。并觀察失血性休克后的腹腔巨噬細(xì)胞在LPS誘導(dǎo)下生成促炎因子的能力，評估轉(zhuǎn)錄因子Nrf2對HS后機(jī)體免疫細(xì)胞促炎能力的潛在調(diào)控作用。
　　1)通過測定血漿促炎因子TNF-α，IL-

3、6和IL-1β，來評估Nrf2基因缺失對于失血性休克小鼠的全身性炎癥反應(yīng)的影響。并檢測血中重癥炎癥指標(biāo)HMGB1的分泌。
　　2)通過肝、肺等重要器官石蠟切片的HE染色，髓過氧化物酶(MPO)活性測定，ELISA測定組織促炎因子的變化來評估Nrf2基因缺失對失血性休克小鼠重要器官的炎性浸潤程度和細(xì)胞損害情況的影響。
　　3)為了評估轉(zhuǎn)錄因子Nrf2對HS后機(jī)體免疫細(xì)胞促炎能力的潛在調(diào)控作用，我們在失血性休克小鼠液體復(fù)蘇24小

4、時(shí)后獲取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，并利用LPS孵育6小時(shí)。取上清，利用ELISA法進(jìn)行細(xì)胞因子水平檢測。
　　結(jié)果：
　　Nrf2-KO組小鼠，相比于WT組小鼠，失血性休克后的肺部和肝臟損傷程度更加嚴(yán)重，表現(xiàn)為組織損傷增加，髓過氧化物酶(MPO)活性上升，促炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生增加。而且Nrf2-KO組小鼠的系統(tǒng)炎癥反應(yīng)顯著升高，表現(xiàn)為血清炎癥因子升高（白介素6，腫瘤壞死因子α及白介素1β），并且HMGB1（高遷移率組蛋白1）表達(dá)水平增