瑞香狼毒根乙醇提取液對寄生水霉生長影響的初步研究.pdf

1、寄生水霉常引起多數(shù)淡水魚類和魚卵患水霉病，導致魚類大量死亡，嚴重影響了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前對于已經(jīng)發(fā)生水霉病的水產(chǎn)養(yǎng)殖動物，并沒有理想的治療藥物。瑞香狼毒、月腺大戟根具有廣泛的抑菌活性，但在抑制寄生水霉方面還沒有相關研究。為探究瑞香狼毒、月腺大戟根對寄生水霉生長的影響，本研究采用超聲輔助系統(tǒng)溶劑提取法制備了兩種常用狼毒根的提取液，比較了兩種常用狼毒根的提取液對寄生水霉的最低抑菌濃度，篩選出瑞香狼毒乙醇提取液為最佳提取液;進一步研究

2、了瑞香狼毒乙醇提取液對寄生水霉菌絲生長、孢子萌發(fā)率、菌絲形態(tài)及超微結構的影響，并通過模擬治療過程探究了瑞香狼毒乙醇提取液對鯽魚寄生水霉病的治療效果。
　　1.從患病鯽魚身上分離出一株水霉菌，通過純化培養(yǎng)，經(jīng)形態(tài)學、分子生物學鑒定出該菌株為寄生水霉菌（Saprolegnia parasitica）。
　　2.根據(jù)溶劑極性大小，用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、水5種溶劑組成溶劑系統(tǒng)，采用超聲技術分別提取了瑞香狼毒、月腺大戟根部有

3、效成分。結果顯示，水溶劑對月腺大戟的提取率最高為21.38％，丙酮溶劑對月腺大戟的提取率最低為0.98％，石油醚、乙酸乙酯、乙醇溶劑對月腺大戟的提取率分別為:2.19％、1.91％、1.51％;乙酸乙酯溶劑對瑞香狼毒的提取率最高為12.03％，石油醚對瑞香狼毒的提取率最低為0.50％，丙酮、乙醇、水溶劑對瑞香狼毒的提取率分別為:4.22％、1.45％、3.26％。
　　3.采用微量稀釋法分別測定石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、水5種

4、溶劑提取液對寄生水霉孢子的最低抑菌濃度，其中月腺大戟不同溶劑提取液的最低抑菌濃度為2.5mg/mL，最佳提取溶劑為乙醇;瑞香狼毒不同溶劑提取液的最低抑菌濃度為0.15625mg/mL，最佳提取溶劑為乙醇。
　　4.通過測定瑞香狼毒乙醇提取液對寄生水霉菌絲生長的影響，發(fā)現(xiàn)試驗組菌落生長直徑顯著低于空白對照組(P＜0.05)。瑞香狼毒乙醇提取液濃度為0.3125mg/mL時，對寄生水霉菌絲生長抑制率達100％，毒力回歸方程Y=3.15

5、03X+9.9012，EC50為0.02781mg/mL，瑞香狼毒乙醇提取液對寄生水霉的抑制作用接近亞甲基藍對水霉菌的抑制作用。20℃培養(yǎng)24h，空白對照組寄生水霉孢子平均萌發(fā)率為86.67％;0.625mg/mL瑞香狼毒乙醇提取液處理組，寄生水霉孢子萌發(fā)率為0.00％，回歸方程為Y=290.45X2-304.45X+78.106。光學顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，試驗組寄生水霉菌絲體染色不均勻，出現(xiàn)透明現(xiàn)象。掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，試驗組菌絲體表面粗糙、

6、皺縮。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，試驗組寄生水霉孢子細胞壁模糊，細胞質電子密度低，細胞內(nèi)容物少，出現(xiàn)大量空泡，細胞結構被破壞;試驗組菌絲體細胞壁模糊、皺縮甚至消失，細胞質電子密度低，細胞內(nèi)容物少，相鄰細胞膜出現(xiàn)部分粘連現(xiàn)象。瑞香狼毒乙醇提取液能通過破壞寄生水霉菌絲、寄生水霉孢子細胞結構有效抑制寄生水霉生長。
　　5.模擬治療過程對鯽魚影響的研究中，只有0.625mg/mL組在試驗24h，治療效果顯著高于空白對照組(P＜0.05)。觀察到未感

7、染寄生水霉的試驗魚沒有明顯不適癥狀;感染寄生水霉病的試驗魚出現(xiàn)了反應遲緩、游動失衡甚至死亡現(xiàn)象，在死亡的試驗魚眼部觀察到點狀出血點，與鯽魚的中毒癥狀觀察試驗結果相似。對死亡率統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，未感染寄生水霉的試驗魚沒有出現(xiàn)死亡情況;感染寄生水霉病的鯽魚，試驗24h，0.625mg/mL藥液浸泡組死亡率顯著高于空白對照組(P＜0.05);試驗48h，藥物濃度達到0.15625mg/mL浸泡組患病鯽魚死亡率均顯著高于空白對照組(P＜0.05);試驗