利用RNAi技術(shù)控制褐飛虱的研究.pdf

1、RNAi作用是內(nèi)源性或外源性的雙鏈RNA(dsRNA)在Dicer酶的作用下形成21-25nt大小的小干擾RNA(siRNA)，siRNA在Ago蛋白的作用下，組裝到RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)中，從而特異性地對(duì)同源靶標(biāo)mRNA進(jìn)行切割消化進(jìn)而抑制其表達(dá)翻譯。自這種基于序列特異性dsRNA對(duì)特定基因的沉默作用被發(fā)現(xiàn)后，就具備用來(lái)對(duì)昆蟲(chóng)的基因進(jìn)行下調(diào)，進(jìn)而達(dá)到抗蟲(chóng)并使害蟲(chóng)致死的潛能。另外，利用RNAi技術(shù)抗蟲(chóng)可以有效抵抗蟲(chóng)害，并且比

2、較安全，更為重要的是昆蟲(chóng)進(jìn)化不易對(duì)其產(chǎn)生抗性，這些優(yōu)點(diǎn)使得RNAi技術(shù)成為新的抗蟲(chóng)策略的首選。
　　 在利用RNAi技術(shù)進(jìn)行抗褐飛虱轉(zhuǎn)基因水稻的研究時(shí)，首先需要選擇效率高的靶標(biāo)dsRNA，其次需要產(chǎn)生高通量的dsRNA，此外還要確保轉(zhuǎn)基因水稻產(chǎn)生的dsRNA可以在昆蟲(chóng)進(jìn)食后運(yùn)輸?shù)嚼ハx(chóng)體內(nèi)并發(fā)揮RNAi作用。因此本研究中選擇了的靶標(biāo)dsRNA基因有陽(yáng)離子氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因Cationic Amino AcidTransporter

3、，己糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因Hexose Transporter1，核糖體蛋白基因Ribosomal protein L23及Ribosomal protein S3e。研究中針對(duì)所選的基因成功構(gòu)建4個(gè)干擾載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法導(dǎo)入到水稻Oryza sativa中，對(duì)獲得的轉(zhuǎn)基因水稻進(jìn)行Western blot分析，檢測(cè)到轉(zhuǎn)基因水稻中草甘膦抗性基因1174成功表達(dá)，Northern blot分析表明轉(zhuǎn)基因水稻成功表達(dá)dsRNA。此外還對(duì)轉(zhuǎn)基因