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文檔簡介
1、ERF(ethylene responsive factor)家族是AP2/ERF轉錄因子大家族的一個主要亞家族,在調節(jié)植物生物和非生物逆境反應中發(fā)揮重要作用。我們實驗室在前期研究中,分離了一個來自水稻ERF B-3亞組的基因——OsBIERF3,研究表明過量表達OsBIERF3的煙草增強了對野火病、病毒病等病害的抗性。最近的研究也表明,許多ERF B-3亞組的基因在植物抗性反應調控中發(fā)揮重要作用。
本文擬克隆水稻ERF
2、B-3亞組基因,并采用過量表達技術和RNAi沉默技術研究其在植物抗性反應中的功能。
1.水稻ERF B-3亞組基因的鑒定與表達分析
利用RT-PCR克隆鑒定了來自水稻ERF B-3亞組的15個基因,并對其在激素(ACC、JA)處理后的表達譜進行了分析,結果表明,大部分水稻ERF基因都能被ACC或JA誘導表達,但是不同基因在表達時序及表達量上存在差別。同時挑選了3個基因(OsBIERF3、Os08g44960、
3、Os04g46220)做轉錄因子活性分析,結果表明其均具有轉錄激活活性。
2.水稻ERF B-3亞組基因過量表達載體和RNAi載體的構建以及轉基因水稻的培育和鑒定
分別構建了15個已克隆基因的過量表達和RNAi沉默載體,利用農桿菌介導的基因轉化技術對水稻進行了轉化,獲得了OsBIERF3過量表達和RNAi沉默株系各27、20個,Os04g46220過量表達和RNAi沉默株系各15、6個,Os05g49010過
4、量表達和RNAi沉默株系各6、2個,Os02g45130過量表達株系10個。T1代潮霉素基因檢測大部分為陽性系。利用real-time PCR檢測過量表達和沉默植株中目的基因的表達量,均有不同程度的上調和下調。
3.OsBIERF3抗逆生理功能分析
分別研究了OsBIERF3 T1代過量表達和沉默植株在冷脅迫、鹽脅迫和干旱脅迫條件下的反應。結果顯示,OsBIERF3沉默植株增強了水稻對冷脅迫的抗性,其死亡率顯
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