水稻ERF轉錄因子B-3亞組基因的功能分析.pdf

1、ERF(ethylene responsive factor)家族是AP2/ERF轉錄因子大家族的一個主要亞家族，在調節(jié)植物生物和非生物逆境反應中發(fā)揮重要作用。我們實驗室在前期研究中，分離了一個來自水稻ERF B-3亞組的基因——OsBIERF3，研究表明過量表達OsBIERF3的煙草增強了對野火病、病毒病等病害的抗性。最近的研究也表明，許多ERF B-3亞組的基因在植物抗性反應調控中發(fā)揮重要作用。
　　 本文擬克隆水稻ERF

2、B-3亞組基因，并采用過量表達技術和RNAi沉默技術研究其在植物抗性反應中的功能。
　　 1.水稻ERF B-3亞組基因的鑒定與表達分析
　　 利用RT-PCR克隆鑒定了來自水稻ERF B-3亞組的15個基因，并對其在激素(ACC、JA)處理后的表達譜進行了分析，結果表明，大部分水稻ERF基因都能被ACC或JA誘導表達，但是不同基因在表達時序及表達量上存在差別。同時挑選了3個基因（OsBIERF3、Os08g44960、

3、Os04g46220）做轉錄因子活性分析，結果表明其均具有轉錄激活活性。
　　 2.水稻ERF B-3亞組基因過量表達載體和RNAi載體的構建以及轉基因水稻的培育和鑒定
　　 分別構建了15個已克隆基因的過量表達和RNAi沉默載體，利用農桿菌介導的基因轉化技術對水稻進行了轉化，獲得了OsBIERF3過量表達和RNAi沉默株系各27、20個，Os04g46220過量表達和RNAi沉默株系各15、6個，Os05g49010過

4、量表達和RNAi沉默株系各6、2個，Os02g45130過量表達株系10個。T1代潮霉素基因檢測大部分為陽性系。利用real-time PCR檢測過量表達和沉默植株中目的基因的表達量，均有不同程度的上調和下調。
　　 3.OsBIERF3抗逆生理功能分析
　　 分別研究了OsBIERF3 T1代過量表達和沉默植株在冷脅迫、鹽脅迫和干旱脅迫條件下的反應。結果顯示，OsBIERF3沉默植株增強了水稻對冷脅迫的抗性，其死亡率顯