五株內(nèi)生真菌的化學(xué)成分及其生物活性研究.pdf

1、真菌具有豐富的物種和生態(tài)多樣性，能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)和活性多樣的次生代謝產(chǎn)物，是藥物先導(dǎo)化合物的重要來源之一。但是從常規(guī)真菌資源中發(fā)現(xiàn)具備開發(fā)潛力的活性新物質(zhì)面臨著巨大的挑戰(zhàn)，而那些生長在自然環(huán)境惡劣、營養(yǎng)條件匱乏地區(qū)的特殊生境真菌，為了生存，會逐步形成不同于普通土壤真菌的獨(dú)特生存策略，進(jìn)而代謝結(jié)構(gòu)新穎多樣且活性廣泛的化學(xué)成分。內(nèi)生真菌是指在寄主中度過全部或近乎全部的生活周期而不使寄主表現(xiàn)任何癥狀的一類真菌，它們與寄主長期協(xié)同進(jìn)化演變成一種特殊的

2、互惠共生關(guān)系，具有獨(dú)特的生存環(huán)境與生存方式。內(nèi)生真菌作為可持續(xù)的、活性多樣的和結(jié)構(gòu)新穎的先導(dǎo)化合物的重要來源受到人們的廣泛關(guān)注。而對于以一些特殊群體（如苔蘚和地衣）為宿主的內(nèi)生真菌的代謝產(chǎn)物研究則具有更大的開發(fā)潛力。
　　本研究選取來源于不同生存環(huán)境下的苔蘚和地農(nóng)內(nèi)生真菌為研究材料，采用PDA(Potato Dextrose Agar)培養(yǎng)基進(jìn)行小規(guī)模發(fā)酵并制備其代謝產(chǎn)物的粗提物，依據(jù)初步的活性與化學(xué)篩選結(jié)果選擇了五株內(nèi)生真菌（包

3、括一株苔蘚內(nèi)生真菌和四株地衣內(nèi)生真菌）進(jìn)行一定規(guī)模的放大發(fā)酵。采用硅膠柱色譜、ODS柱色譜、凝膠柱色譜以及高效液相柱色譜等多種分離純化技術(shù)對各菌株的乙酸乙酯提取物分別進(jìn)行系統(tǒng)的分離純化。從五株真菌的放大發(fā)酵產(chǎn)物中共分離得到83個(gè)化合物，其中28個(gè)為新化合物，應(yīng)用各種現(xiàn)代波譜技術(shù)（如質(zhì)譜、核磁共振、單晶衍射等），結(jié)合化學(xué)衍生化和圓二色譜等方法確定了化合物的平面結(jié)構(gòu)和立體構(gòu)型，并根據(jù)結(jié)構(gòu)特征推測了部分重要化合物的可能生物合成途徑與相互轉(zhuǎn)化關(guān)

4、系。對分離得到的化合物進(jìn)行抗真菌和細(xì)胞毒活性評價(jià)，結(jié)果顯示部分代謝產(chǎn)物具有顯著的活性。對化合物進(jìn)一步的活性機(jī)制研究表明，化合物37可以通過損傷白色念珠菌的細(xì)胞膜，引起細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)積累導(dǎo)致細(xì)胞死亡;化合物58則可以明顯誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。另外，我們對苝醌類化合物（化合物77和78）以及產(chǎn)生該類化合物的菌株P(guān)haeosphaeria sp.的粗提物分別進(jìn)行可見光和紫外光下的光化反應(yīng)，該反應(yīng)導(dǎo)致其抗真菌