姜黃素類化合物對東莨菪堿致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用機(jī)理研究.pdf

1、目的：1.觀察固體分散劑型的姜黃素類化合物對東莨菪堿致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型的影響,初步探索其作用機(jī)制。2.觀察四氫姜黃素固體分散劑對東莨菪堿致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型和H2O2氧化損傷PC12細(xì)胞模型的影響,進(jìn)一步探討其對乙酰膽堿能系統(tǒng)、抗氧化及抗細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
　　方法：1.姜黃素類化合物改善學(xué)習(xí)記憶障礙的活性篩選實(shí)驗(yàn)：采用東莨菪堿致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型,給藥組小鼠分別灌胃姜黃素類化合物(動物實(shí)驗(yàn)各化合物均為固體分散劑)：姜黃

2、素(Cur,200mg/kg)、去甲氧基姜黃素(DMC,200mg/kg)、雙去甲氧基姜黃素(BDMC,200mg/kg)和四氫姜黃素(THC,200mg/kg)：①姜黃素類化合物對學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的影響(Morris水迷宮法);②姜黃素類化合物對學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠腦組織病理學(xué)檢查;③姜黃素類化合物對學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠腦組織中乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(ChAT),乙酰膽堿酯酶(AChE)和乙酰膽堿(ACh)的含量的影響(免疫組化法)。2.四氫姜黃素(

3、THC)固體分散劑對東莨菪堿致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型改善作用的研究：采用東莨菪堿致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型,分別灌胃四氫姜黃素(THC)：高(400mg/kg)、中(200mg/kg)和低(100mg/kg)劑量：①通過水迷宮行為學(xué)觀察四氫姜黃素(THC)對學(xué)習(xí)記憶的影響;②通過病理學(xué)Nissl觀察小鼠腦組織中尼氏小體;③四氫姜黃素對腦組織中ChAT,AChE和ACh含量的影響(免疫組化檢測);④四氫姜黃素對海馬中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-

4、Px),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)所造成的濃度影響。3.四氫姜黃素(THC)對H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的作用研究：①通過CCK-8法測定四氫姜黃素對PC12細(xì)胞活性改變,PI、Hoechst染色檢測細(xì)胞凋亡,②ROS染色檢測細(xì)胞活性氧變化。
　　結(jié)果：1.姜黃素類化合物改善學(xué)習(xí)記憶障礙的活性篩選試驗(yàn)：①與模型組比較,在水迷宮定位訓(xùn)練中,姜黃素(Cur,200mg/kg)和雙去甲氧基姜黃素(BDMC,200mg/

5、kg)可縮短小鼠潛伏期(P＜0.05),降低小鼠在水中的運(yùn)動總距離(P＜0.01),四氫姜黃素(THC,200mg/kg)可明顯縮短小鼠潛伏期(P＜0.01),降低小鼠在水中的運(yùn)動總距離(P＜0.01);空間探索時,姜黃素(Cur,200mg/kg)和雙去甲氧基姜黃素(BDMC,200mg/kg)可明顯增加小鼠進(jìn)入有效區(qū)域的時間(P＜0.01),小鼠進(jìn)入原平臺位置次數(shù)明顯增多(P＜0.01);四氫姜黃素(THC,200mg/kg)也可使

6、小鼠進(jìn)入有效區(qū)域的時間,運(yùn)動距離加長,并且進(jìn)入原平臺位置次數(shù)增多(P＜0.01)。顯示姜黃素類化合物可改善小鼠對空間學(xué)習(xí)記憶的能力。②給藥組小鼠與造模組相比無明顯差異。③通過小鼠大腦進(jìn)行免疫組化檢測可知,姜黃素化合物均能升高小鼠大腦的ChAT蛋白含量：姜黃素(P＜0.05)、去甲氧基姜黃素(P＜0.05)、雙去甲氧基姜黃素(P＜0.05)和四氫姜黃素(P＜0.01);同時可降低小鼠大腦的AChE蛋白含量：姜黃素(P＜0.05)、去甲氧基

7、姜黃素(P＜0.01)雙去甲氧基姜黃素(P＜0.05)。2.四氫姜黃素(THC)固體分散劑對東莨菪堿致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型改善作用的研究：①不同劑量的四氫姜黃素均能降低小鼠在定位巡航實(shí)驗(yàn)中的潛伏時間(P＜0.01),同時減少運(yùn)動總距離(P＜0.01)?？臻g探索顯示,四氫姜黃素可增加小鼠在有效象限的運(yùn)動時間及距離(P＞0.05)。②T400(THC400mg/kg)組比模型組尼氏小體個數(shù)多于模型組,各組之間均無統(tǒng)計學(xué)意義。③高劑量(400

8、mg/kg)的四氫姜黃素固體分散劑可升高ChAT,降低AChE蛋白含量(P＜0.05);④并能降低海馬內(nèi)MDA含量(P＜0.01),升高SOD含量(P＜0.05)。說明四氫姜黃素不僅可以調(diào)節(jié)乙酰膽堿的合成通路,并具有抗氧化作用。3.四氫姜黃素(THC)對H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的作用研究：通過CCK-8實(shí)驗(yàn)、過氧化氫為100umol/L時,PC12細(xì)胞存活率顯著下降(P＜0.01)。PI染色和Hoechst染色實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)H2O2+T

9、HC組與H2O2組相比,無明顯差異(P＞0.05)。但通過ROS檢測細(xì)胞活性氧水平發(fā)現(xiàn),H2O2+THC組較H2O2組ROS熒光信號明顯降低(P＜0.01)。
　　結(jié)論：1.姜黃素類化合物固體分散劑對東莨菪堿引起的學(xué)習(xí)記憶困難,有明顯改善作用,其作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)ChAT及AChE起效。2.四氫姜黃素固體分散劑可改善小鼠記憶能力,其作用機(jī)制可能是調(diào)節(jié)乙酰膽堿的合成和抗氧化共同作用下完成的。3.四氫姜黃素能抑制H2O2對PC12