赭曲霉毒素A誘導HEK293T細胞氧化應激及自噬研究.pdf

1、目的：探討赭曲霉毒素A（OTA）誘導的腎細胞（HEK293T細胞）氧化應激以及該過程與自噬的關系。
　　方法：以HEK293T細胞為實驗對象，通過OTA對細胞進行染毒，運用CCK-8增強型試劑盒對細胞活性進行檢測；運用活性氧檢測試劑盒檢測ROS表達水平；通過Western blot檢測自噬通路中關鍵蛋白（p-ULK1、p-Beclin1、p-mTOR、LC3-B）和氧化應激相關蛋白（ATM/LKB1/AMPK通路及TRAP1、VD

2、AC1和LONP1）的表達情況。
　　結果：⑴OTA處理HEK293T細胞24小時后CCK-8結果表明：與對照組（不予以任何處理）相比1μM、3μM和5μM組均促進細胞生長，細胞存活率分別是105.1％、121.7%和121.3%；7μM、8μM、9μM及10μM組表現為抑制細胞生長，其中7μM組細胞存活率為89.6%，8μM組細胞存活率為49.4%，9μM組細胞存活率為10.5%，10μM組細胞存活率為5.7%。⑵Western

3、 blot檢測自噬相關蛋白結果顯示 OTA處理組中 p-ULK1、p-Beclin1以及LC3B蛋白的表達明顯高于對照組（不予以任何處理），該結果表明OTA誘導了HEK293T細胞自噬的發(fā)生，且8μM組自噬發(fā)生的水平高于7μM組。同時，8μM組及7μM組TRAP1、VDAC1和LONP1蛋白表達均明顯低于對照組（不予以任何處理）。表明7μM和8μM OTA處理HEK293T細胞抑制了TRAP1、VDAC1和LONP1蛋白的表達。⑶活性氧

4、檢測試劑盒檢測結果表明OTA誘導細胞ROS水平升高，其中8μM組ROS熒光強度?X=138.33，7μM組ROS熒光強度?X=37.70，對照組（不予以任何處理）熒光強度?X=1.36。⑷與對照組（不予以任何處理）比較8μM組p-ATM、p-LKB1和p-AMPK蛋白表達明顯增高，7μM組p-ATM、p-LKB1和p-AMPK蛋白的表達無明顯變化，該結果表明8μM OTA誘導細胞氧化應激激活了ATM/LKB1/AMPK信號通路。⑸與對照