分子光譜法測(cè)定蒽環(huán)類抗生素的研究.pdf

1、基于物質(zhì)分子與電磁輻射作用時(shí)，物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生了量子化的能級(jí)之間的躍遷，測(cè)量由此產(chǎn)生的反射、吸收或散射輻射的波長(zhǎng)和強(qiáng)度而進(jìn)行分析的方法，稱為分子光譜法。它是測(cè)定和鑒別分子結(jié)構(gòu)的重要手段。分子光譜根據(jù)吸收電磁波的范周不同，可分為紫外、可見光譜和近紅外光譜、紅外光譜等；根據(jù)電磁波的發(fā)射方式不同又可分為分子熒光、磷光和散射光譜等。本文以葸環(huán)類抗生素為主要研究對(duì)象，研究和發(fā)展了用分子光譜法測(cè)定這類藥物的新體系和新方法。本文重點(diǎn)研究蒽環(huán)類抗生素與某些

2、金屬、染料之間的相互作用的共振瑞利散射光譜和熒光光譜特征、適宜的反應(yīng)條件和影響因素，討論了反應(yīng)機(jī)理，并建立相應(yīng)藥物的分析方法。 主要研究?jī)?nèi)容如下： 1.米托蒽醌金屬配合物與達(dá)旦黃反應(yīng)的共振瑞利散射光譜及其分析應(yīng)用。 在pH2.45的Britton—Robinson(BR)緩沖介質(zhì)中，葸環(huán)類抗生素米托蒽醌(mitoxantrone，MXT)能與金屬離子Pd(Ⅱ)、Cu(Ⅱ)、Co(Ⅱ)形成1：2陽(yáng)離子配合物，這些陽(yáng)

3、離子配合物借助靜電作用力和疏水作用能進(jìn)一步和陰離子染料達(dá)旦黃(TY)形成1：2的三元離子締合物，引起吸收光譜和熒光光譜的微小變化，但導(dǎo)致共振瑞利散射(RRS)的顯著增強(qiáng)，不同金屬離子所形成結(jié)合產(chǎn)物的RRS光譜特征相似，最大RRS峰均位于454nm處。但不同金屬離子引起的RRS增強(qiáng)的程度不相同，其順序?yàn)椋篜d(Ⅱ)＞Co(Ⅱ)＞Cu(Ⅱ)。RRS的增量(ΔI)與米托蒽醌的濃度在一定范圍內(nèi)線性相關(guān)，據(jù)此建立了一種用達(dá)旦黃作探針RRS法測(cè)定米

4、托葸醌的高靈敏度、簡(jiǎn)單、快捷的分析方法。該方法的線性范圍分別為0.031～2.4μg/mL(Pd2+—MXT)，0.032～1.2μg/mL(Co2+—MXT)，0.03～1.2μg/mL(Cu2+—MXT)，檢出限(3σ)分別為9.4ng/mL(Pd2+—MXT)，9.7ng/mL，(Co2+—MXT)，9.8ng/mL(Cu2+—MXT)，。該方法能夠用于痕量米托蒽醌的測(cè)定。本文討論了米托蒽醌—金屬配合物和達(dá)旦黃反應(yīng)的最佳反應(yīng)條件及

5、影響因素，對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物的RRS、吸收光譜及熒光光譜的特征進(jìn)行了討論。并以MXT-Pd為例探討了米托蒽醌—金屬配合物與達(dá)旦黃的結(jié)合模式和反應(yīng)機(jī)理。 2.鈰(Ⅳ)—蒽環(huán)類抗生素與茜素紅三元配合物的共振瑞利散射光譜研究及其分析應(yīng)用。 在pH5.4的HAC—NaAC緩沖介質(zhì)中，蒽環(huán)類抗生素米托蒽醌(mitoxantrone，MXT)、多柔比星(daunorubicin，DNR)和柔紅霉素(doxorubicin，DOX)能與金屬離

6、子Ce(Ⅳ)形成1：2陽(yáng)離子配合物，這些陽(yáng)離子配合物借助靜電作用力和疏水作用能進(jìn)一步和陰離子染料茜素紅(AR)形成1：8的三元離子締合物，引起共振瑞利散射(RRS)的顯著增強(qiáng)，不同藥物所形成結(jié)合產(chǎn)物的RRS光譜特征相似，最大RRS峰均位于368nm處，并且在548nm處有一小峰。但不同藥物引起的RRS增強(qiáng)的程度不相同，其順序?yàn)椋篗XT＞DOX＞DNR。RRS的增量(ΔI)與藥物的濃度在一定范圍內(nèi)線性相關(guān)，據(jù)此建立了一種用茜素紅作探針RR

7、S法測(cè)定蒽環(huán)類抗生素的高靈敏度、簡(jiǎn)單、快捷的分析方法。該方法的線性范圍分別為0.024～2.5μg/mL(MXT)，0.067～2.0μg/mL(DOX)，0.082～2.0μg/mL(DNR)，檢出限(3σ)分別為7.2ng/mL(MXT)，12.5ng/mL(DOX)，15.9ng/mL(DNR)。該方法能夠用于痕量蒽環(huán)類抗生素的測(cè)定。本文討論了鈰(Ⅳ)—蒽環(huán)類抗生素和茜素紅反應(yīng)的最佳反應(yīng)條件及影響因素，對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物的RRS、吸收光譜

8、及熒光光譜的特征進(jìn)行了討論。并進(jìn)一步探討了Ce(Ⅳ)—蒽環(huán)類抗生素金屬配合物與茜素紅的結(jié)合模式和反應(yīng)機(jī)理。 3.分子光譜法研究金屬離子Ce(Ⅳ)與蒽環(huán)類抗生素的相互作用及其分析應(yīng)用。 3.1 熒光法測(cè)定某些蒽環(huán)類抗生素。 在適當(dāng)?shù)木彌_介質(zhì)中，柔紅霉素(daunorubicin，DNR)、多柔比星(doxorubicin，DOX)、米托蒽醌(mitoxantrone，MXT)等蒽環(huán)類抗生素能將無熒光的鈰(Ⅳ)離子還

9、原成能發(fā)射特征熒光的鈰(Ⅲ)離子。加入三磷酸鈉，可使體系的熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)。在激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為303nm和354nm處測(cè)定其熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度的增量(ΔF)與蒽環(huán)類抗生素的濃度在一定范圍內(nèi)線性相關(guān)，由此建立了高靈敏度的間接測(cè)定蒽環(huán)類抗生素的新方法。三種蒽環(huán)類抗生素的線性范圍和檢出限分別為0.043～3.0μg/mL和12.8ng/mL(DNR)；0.045～3.0μg/mL和13.4ng/mL(DOX)；0.022～2.8μg/mL

10、和6.5ng/mL(MXT)。將此法應(yīng)用于尿液和血清樣品的分析測(cè)定，其回收率在94.7％～106％，結(jié)果滿意。 3.2 褪色分光光度法測(cè)定某些蒽環(huán)類抗生素。 在適當(dāng)?shù)木彌_介質(zhì)中，柔紅霉素(daunorubicin，DNR)、多柔比星(doxorubicin，DOX)、米托蒽醌(mitoxantrone，MXT)等蒽環(huán)類抗生素能與鈰(Ⅳ)離子將其還原成鈰(Ⅲ)離子，溶液的吸收光譜發(fā)生變化，體系發(fā)生明顯的褪色作用，最大褪色波

11、長(zhǎng)位于316nm，褪色峰吸收強(qiáng)度(ΔA)與蒽環(huán)類抗生素的濃度在一定范圍內(nèi)線性相關(guān)，由此建立了高靈敏度的間接測(cè)定蒽環(huán)類抗生素的新方法。三種蒽環(huán)類抗生素的線性范圍和檢出限分別為0.88～10.0μg/mL和0.26μg/mL(MXT)；1.69～10.0μg/mL和0.51μg/mL(DOX)；1.42～10.0μg/mL和0.43μg/mL(DNR)。將此法應(yīng)用于尿液和血清樣品的分析測(cè)定，其回收率在97％～104％，結(jié)果滿意。 4

12、.分子光譜法同時(shí)測(cè)定兩種蒽環(huán)類抗生素。 4.1 偏最小二乘—同步熒光光譜法同時(shí)測(cè)定兩種蒽環(huán)類抗生素。 將偏最小二乘法(PLS)用于同步熒光光譜嚴(yán)重重疊的多柔比星(doxorubicin，DON)和柔紅霉素(daunorubicin，DNR)兩組分混合體系進(jìn)行波譜解析，建立了該混合體系含量同時(shí)測(cè)定的新方法。在pH3.45B-R緩沖溶液中，波長(zhǎng)差△λ=55nm時(shí)，用測(cè)得的25個(gè)混合標(biāo)樣的同步熒光原始光譜、一階導(dǎo)數(shù)光譜值建立模

13、型。多柔比星和柔紅霉素在濃度為0.05～3.0μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，所建立的測(cè)定二者模型的相關(guān)系數(shù)分別為0.9897和0.9909：平均回收率分別為100.97％和101.36％；預(yù)測(cè)均方根誤差(RMSEP)分別為0.1400和0.1395：預(yù)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)誤差(SEP)分別為0.1541和0.1525。將該方法應(yīng)用于尿液樣品的分析測(cè)定，效果良好。 4.2 偏最小二乘—紫外分光光度法同時(shí)測(cè)定兩種蒽環(huán)類抗生素。 將偏

14、最小二乘法(PLS)用于吸收光譜嚴(yán)重重疊的多柔比星(doxorubicin，DOX)和柔紅霉素(daunorubicin，DNR)兩組分混合體系進(jìn)行波譜解析，建立了該混合體系含量同時(shí)測(cè)定的新方法。在pH2.46B-R緩沖溶液中，用測(cè)得的25個(gè)混合標(biāo)樣的吸收原始光譜、一階導(dǎo)數(shù)光譜值建立模型。多柔比星和柔紅霉素在濃度為5.0～60.0μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，所建立的測(cè)定二者模型的相關(guān)系數(shù)分別為0.9945和0.9858；平均回收