抗足細(xì)胞抗體與原發(fā)性膜性腎病發(fā)病機(jī)制的研究.pdf

1、目的：檢測(cè)膜性腎病病人血液中抗足細(xì)胞膜蛋白抗體，研究抗足細(xì)胞抗體在原發(fā)性膜性腎病(IMN)發(fā)病機(jī)制中的作用，探討診斷原發(fā)性膜性腎病和監(jiān)測(cè)其病情變化的新方法。研究背景：原發(fā)性MN是成人腎病綜合征的最常見(jiàn)病理類型之一，以腎小球上皮細(xì)胞下免疫復(fù)合物的沉積，基底膜的彌漫性增厚為主要病理變化。國(guó)內(nèi)據(jù)北京、南京及上海的資料報(bào)道，膜性腎病發(fā)病率約占原發(fā)性腎小球疾病的9.9%～13.5%。約1/3患者可自發(fā)緩解，但仍有40%的患者在10年后進(jìn)入終末期腎

2、病(ESRD)。目前認(rèn)為原發(fā)性MN的發(fā)病機(jī)制為免疫復(fù)合物機(jī)制，免疫復(fù)合物沉積于腎小球上皮細(xì)胞下，激活補(bǔ)體，形成膜攻擊復(fù)合物(C5b-9)，導(dǎo)致足細(xì)胞受損，足細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，出現(xiàn)足細(xì)胞凋亡、壞死和缺失等一系列變化，其屏障作用消失，產(chǎn)生大量蛋白尿。近年國(guó)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)在原發(fā)性MN患者血清中含有抗足細(xì)胞膜蛋白抗體，認(rèn)為這是原發(fā)性MN發(fā)病的主要病因。1994年SatioA等克隆出被動(dòng)型Heymann腎炎的靶抗原megalin，后續(xù)研究

3、發(fā)現(xiàn)megalin并不是人原發(fā)性膜性腎病的靶抗原，因?yàn)槿俗慵?xì)胞并不表達(dá)megalin。2002年Debiec等第一次發(fā)現(xiàn)新生兒膜性腎病的抗原是足細(xì)胞表達(dá)的中性肽鏈內(nèi)切酶(NEP)。2009年Beck等研究發(fā)現(xiàn)，在70%原發(fā)性膜性腎病患者血清中發(fā)現(xiàn)抗磷脂酶A2受體的抗體，認(rèn)為M型磷脂酶A2受體(PLA2R)為人類膜性腎病的靶抗原。證實(shí)了PLA2R是原發(fā)性MN發(fā)病的一個(gè)主要抗原，檢測(cè)抗-PLA2R抗體在原發(fā)性MN患者中是一個(gè)非常敏感的指標(biāo)。

4、并有研究發(fā)現(xiàn)此抗體在指導(dǎo)治療方面也將發(fā)揮巨大作用。監(jiān)測(cè)血循環(huán)中的抗-PLA2R抗體的濃度可以評(píng)估疾病的活動(dòng)度，對(duì)疾病治療和預(yù)后提供幫助，還可以作為MN臨床復(fù)發(fā)前的先知指標(biāo)。2010年，Prunotto等人用結(jié)合蛋白組學(xué)法測(cè)定人類MN患者血清和腎小球中的抗足細(xì)胞膜蛋白抗體，在病人血清中發(fā)現(xiàn)了特定的抗醛糖氧化酶(抗-AR)和抗超氧化物歧化酶(抗-SOD2)lgG4。但仍然有近1/3的患者不清楚抗原是何物質(zhì)。國(guó)人膜性腎病患者體內(nèi)是否存在抗足細(xì)

5、胞抗體，尚不完全清楚。本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究，采用間接免疫熒光的方法，為以血清學(xué)檢查診斷膜性腎病提供理論依據(jù)，為進(jìn)一步尋找和證明人類膜性腎病抗原提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對(duì)指導(dǎo)臨床治療、觀察預(yù)后及抗體轉(zhuǎn)歸有著重要意義。
　　方法：原發(fā)性MN患者血清：選取2010年3月至2011年12月于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腎內(nèi)科住院經(jīng)腎穿刺活檢病理首次確診為膜性腎病的患者60例，除外繼發(fā)性MN，其中肝炎篩查、自身抗體、腫瘤標(biāo)記物均陰性，且未用激素及免疫抑制劑

6、。其中有54例臨床24h尿蛋白定量>3.5g。60例患者血肌酐均在正常范圍，GFR>90ml/min。原發(fā)性lgA腎病患者血清：取2010年3月至2011年12月于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腎內(nèi)科住院并行腎穿刺活檢病理首次確診為原發(fā)性lgA腎病的患者54例，除外系統(tǒng)性紅斑狼瘡，過(guò)敏性紫癜，肝硬化，銀屑病等，未用過(guò)激素及免疫抑制劑。繼發(fā)性MN：取2010年3月至2011年12月于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腎內(nèi)科住院并行腎穿刺活檢臨床和病理首次確診為V

7、型狼瘡性腎炎的患者15例，未用過(guò)激素及免疫抑制劑，臨床24h尿蛋白定量>3.5g。血肌酐正常范圍，GFR>90ml/min。取2010年3月至2011年12月于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腎內(nèi)科住院并行腎穿刺活檢病理首次確診為乙型肝炎病毒相關(guān)性MN患者12例，未用過(guò)激素及免疫抑制劑，未經(jīng)抗病毒治療，臨床24h尿蛋白定量>3.5g。血肌酐正常范圍，GFR>90ml/min。正常人血清：健康志愿者50例。制備人腎組織冰凍切片，分別滴加原發(fā)性MN患者

8、血清、原發(fā)性IgA腎病患者血清、健康人血清，V型狼瘡性腎炎患者血清，及乙型肝炎病毒相關(guān)性MN患者血清。(原血清液未稀釋)，熒光顯微鏡觀察各組變化。并計(jì)算抗足細(xì)胞抗體在MN中的檢出率。進(jìn)一步做原發(fā)性MN滴加的腎組織冰凍切片，PV-9000二步免疫組織化學(xué)方法觀察免疫沉積物部位及沉積物的IgG亞型。采用北航MED6.0圖像分析體統(tǒng)分析表達(dá)部位。
　　結(jié)果：間接免疫熒光結(jié)果顯示，在健康對(duì)照組血清中和其他腎小球疾病及繼發(fā)性MN中均未檢測(cè)到