尿路致病性大腸桿菌在感染中與尿路上皮屏障之間的相互作用.pdf

1、第一部分尿路致病性大腸桿菌感染量和葡糖氨基葡聚糖與初始尿路感染之間的關(guān)系
　　目的：本實驗旨在研究尿路致病性大腸桿菌（uropathogenic Escherichia coli,UPEC）的量與膀胱葡糖氨基葡聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）層的狀況與初始尿路感染之間的關(guān)系。
　　方法：80只雌性小鼠隨機分為魚精蛋白灌注組(PS,40只)，對照組（40只）PS組灌注魚精蛋白溶液30min,而對照組灌注無

2、菌生理鹽水30min。每一組又分別分為4個亞組，每個亞組10只小鼠，通過膀胱灌注的方式，每實驗組中4個亞組的小鼠分別接受不同梯次的UPEC感染分別為102,103,104,105CFU，在感染12h后，在收集小鼠尿液標(biāo)本后，小鼠被處死，獲取膀胱標(biāo)本，膀胱與尿液的載菌量分別被確定。
　　結(jié)果：除了105CFU的亞組外，兩組的膀胱載菌量有著顯著的不同，對照組的膀胱載菌量明顯的低于PS組。與對照組相比，在102和103 CFU感染劑量下

3、，PS組的小鼠對UPEC更加易感，其膀胱載菌陽性的發(fā)生率更高。但是，在104和105CFU的感染劑量下，兩組膀胱載菌陽性的發(fā)生率比較無統(tǒng)計學(xué)差異。在102的感染計量下，PS組的小鼠也可以發(fā)生膀胱壁陽性載菌的事件，另外不是所有膀胱載菌陽性的小鼠尿細菌培養(yǎng)可以檢測到細菌的存在。
　　結(jié)論：GAGs層的破壞可以顯著提高膀胱對UPEC的易感性。
　　第二部分抗生素治療后尿細菌培養(yǎng)陰性的情況下尿路致病性大腸桿菌在女性膀胱中持續(xù)存在

4、r>　　目的：研究與驗證罹患復(fù)發(fā)性尿路感染（UTI）的女性病人在抗生素治療尿液細菌培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰后，是否存在尿路致病性大腸桿菌的持續(xù)定植，為驗證細胞內(nèi)菌群（intracellular bacterial communities，IBCs）病理循環(huán)理論提供進一步的證據(jù)。
　　方法：研究對象為具有非復(fù)雜性復(fù)發(fā)性尿路感染病史的32名女性病人，在其中一次感染，經(jīng)過足夠的抗生素治療后，收集其干凈尿液和經(jīng)膀胱鏡活檢膀胱上皮標(biāo)本，分別經(jīng)過細菌培養(yǎng)檢測

5、、菌種鑒定等常規(guī)細菌學(xué)檢測。并通過聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）來檢測細菌的系統(tǒng)發(fā)生組別與鑒定16個 UPEC毒性因子（virulence factors，VFs)。UPEC的感染能力是通過利用小鼠感染模型來驗證的，免疫熒光和電子顯微鏡來檢測IBCs的形成。
　　結(jié)果：32名的女性病人的尿液經(jīng)細菌培養(yǎng)檢測均為細菌陰性。其中有6例病人的膀胱活檢組織中培養(yǎng)出了大腸桿菌。經(jīng)瓊脂糖凝膠 PCR檢

6、測顯示：所有的細菌都屬于尿路致病性大腸桿菌，且表達的VFs各有不同。所有被檢測出的UPEC均有在小鼠感染模型中形成IBCs的能力。
　　結(jié)論：即便經(jīng)過抗生素治療，具有鮮明毒性特點和致病特征的UPEC首先在尿路上皮活檢中被檢測出，IBCs病理循環(huán)也確實可能在人類的泌尿道存在，并且在感染過程中起到重要的作用。
　　第三部分1型菌毛粘附素fimH誘導(dǎo)尿路上皮凋亡和抑制GAGs合成相關(guān)酶類表達的研究
　　目的：研究UPEC一類

7、菌毛粘附素fimH對人永生化尿路上皮細胞SV-HUC-1凋亡的影響以及對其GAGs相關(guān)合成酶的表達的影響。
　　方法：采用不同濃度的fimH作用于尿路上皮SV-HUC-1細胞后，Annexin V-FITC/PI雙染和流式細胞儀（FCM）分析細胞的凋亡情況；實時定量PCR與 Western blot檢測GAGs合成相關(guān)酶類包括木糖基轉(zhuǎn)移酶1(Xylt1, xylosyltransferase1)木糖基轉(zhuǎn)移酶2(Xylt,1xylo

8、syltransferase2)硫酸乙酰肝素6-O-硫酸基轉(zhuǎn)移酶1[Heparan sulfate6-O-sulfotransferase1（Hs6st1）] N-去乙?；?磺基傳遞酶(氨基乙酰肝素)1[N-deacetylase/ N- sulfotransferase(heparan glucosaminyl)1,（Ndst1）]硫酸乙酰肝素3-O-硫酸基轉(zhuǎn)移6[Heparan sulfate(glucosamine)3-O-su

9、lfotransferase6,（Hs3st6）]透明質(zhì)酸合成酶1[hyaluronan synthase1(Has1)]的在mRNA和蛋白表達水平的變化。
　　結(jié)果：fimH促進 SV-HUC-1細胞的凋亡，并且此作用具有濃度依賴性，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。并且fimH可以在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水平上明顯下調(diào)GAGs相關(guān)合成酶類的表達。
　　結(jié)論：fimH可以抑制人永生化尿路上皮SV-HUC-1細胞增殖