黃瓜籽蛋白提取及發(fā)酵制備多肽的性質(zhì)研究.pdf

1、本文以黃瓜籽為原料，首先采用堿溶酸沉法提取蛋白質(zhì)，并進行工藝優(yōu)化來得到最大提取率，然后測定所提取蛋白的功能特性。以枯草芽孢桿菌為發(fā)酵菌種處理黃瓜籽生產(chǎn)黃瓜籽多肽，確定最優(yōu)提取參數(shù)，對比所提黃瓜籽蛋白及多肽分子量等結(jié)構(gòu)性質(zhì)。將黃瓜籽多肽分離成不同分子量片段，比較各分子量肽的降血壓活性以及與鈣螯合能力，探究最佳結(jié)合鈣能力多肽與其鈣螯合物分子的結(jié)構(gòu)差異，證明了提取物與鈣離子發(fā)生了螯合反應(yīng)。
　　采用單因素和正交實驗，得到黃瓜籽蛋白的最優(yōu)

2、提取工藝參數(shù)為:提取液pH11，料液比1∶30，提取溫度75℃，提取時間60min。影響提取黃瓜籽蛋白的主次因素為提取液pH＞提取溫度＞料液比＞提取時間。
　　同樣采用單因素和正交實驗確定黃瓜籽多肽的最優(yōu)發(fā)酵工藝參數(shù)為:發(fā)酵時間2d，發(fā)酵溫度28℃，接種量8％。影響黃瓜籽多肽得率的條件順序依次為發(fā)酵時間＞發(fā)酵溫度＞接種量。
　　通過SDS-PAGE分析可知經(jīng)過發(fā)酵后黃瓜籽中的大分子蛋白被降解成為更利于身體吸收的低分子量的小分

3、子多肽;DSC、CD、FTIR分析可知黃瓜籽蛋白及多肽內(nèi)部有序結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，各殘基間分子作用力減弱，剛性結(jié)構(gòu)發(fā)生柔性改變，這使黃瓜籽多肽更易于消化吸收。
　　利用超濾法將發(fā)酵所得黃瓜籽多肽分為分子量不同的三組分CSP1(MW＞10KDa)、CSP2(6KDa＜MW＜10KDa)和CSP3(MW＜6KDa)，并測定得出分子量小于6KDa的CSP3組分與鈣離子螯合率最高，達到34.64％，且從整體上看，CSP3結(jié)合膽酸鹽效果也較其它組

4、分略好，降血脂效果優(yōu)于其它組分。
　　選取螯合鈣離子能力最強的CSP3及其鈣螯合物CSP3-Ca進行結(jié)構(gòu)性質(zhì)研究，通過SEM觀察發(fā)現(xiàn)二者微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，CSP3表面致密緊實，粗糙褶皺，但CSP3-Ca疏松多孔，類似于棉絮狀物質(zhì);由EDS分析可知CSP-Ca中鈣含量顯著高于CSP3;經(jīng)過UV、FTIR、熒光光譜分析等證明CSP3和CSP3-Ca的內(nèi)部結(jié)構(gòu)存在差異，CSP3中的金屬結(jié)合位點確實與鈣離子發(fā)生了化學(xué)反應(yīng)，從而螯合住了鈣離