齊墩果酸經(jīng)CoQ10-UCP2-ROS-Cyto-C通路抑制大鼠血管平滑肌細胞增殖.pdf

1、目的：
　　復(fù)制氧化低密度脂蛋白（oxygenized low density lipoprotein,ox-LDL）誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）的增殖模型，研究齊墩果酸（oleanolic acid,OA）對VSMCs增殖的抑制作用。
　　方法：
　　復(fù)制ox-LDL（50μg/ml）誘導(dǎo)的細胞增殖模型，實驗分組為：正常對照組，ox-LDL模型組，O

2、A組（5μM，20μM，35μM），OA組均給藥預(yù)保護12 h后加入ox-LDL造模24 h，RT-PCR和western blot技術(shù)檢測各組細胞中CoQ10、UCP2、Cyto-C的mRNA及蛋白水平，ROS檢測試劑盒檢測細胞內(nèi)ROS表達變化。RT-PCR技術(shù)檢測ox-LDL（50μg/ml）對細胞的經(jīng)時（0，3，6，12，24 h）變化。驗證CoQ10/UCP2/ROS/Cyto-C級聯(lián)通路實驗分組為：ox-LDL模型組、模型+s

3、iCoQ10/siUCP2/京尼平、OA（35μM）組、OA（35μM）+siCoQ10/siUCP2/京尼平組，RT-PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率和目的基因mRNA表達水平。采用SPSS17.0軟件統(tǒng)計分析實驗結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　CCK-8檢測結(jié)果顯示：
　　①50μg/ml ox-LDL成功復(fù)制VSMCs增殖模型，而在加入5，20，35μM OA預(yù)保護12 h后對細胞存活率均有明顯的抑制作用（p＜0.05）；

4、　　②200 ng si-RNA組作用48 h對細胞的存活率沒有影響（p＞0.05）。3，6，12，24 h CoQ10與UCP2 mRNA表達量上升，而Cyto-C mRNA表達量下降，提示CoQ10與UCP2 mRNA表達量成正相關(guān)，CoQ10、UCP2與Cyto-C mRNA的表達量呈負相關(guān)。模型組CoQ10、UCP2mRNA和蛋白水平較正常組均上升（p＜0.05），Cyto-C mRNA和蛋白水平，細胞內(nèi)ROS含量較正常組均下降

5、（p＜0.05），提示CoQ10、UCP2與細胞增殖呈正相關(guān)，Cyto-C、ROS與細胞增殖呈負相關(guān)。OA組CoQ10、UCP2 mRNA和蛋白水平較模型組均下降（p＜0.05），Cyto-C mRNA和蛋白水平，細胞內(nèi)ROS含量較模型組均上升（p＜0.05），提示OA可通過下調(diào)CoQ10、UCP2，上調(diào)ROS、Cyto-C抑制VSMCs異常增殖。經(jīng)si-CoQ10處理后，模型組中CoQ10 mRNA表達沉默（沉默效率＞50%），UCP

6、2 mRNA表達較正常組明顯下降（p＜0.05），提示CoQ10正調(diào)控UCP2；OA組中CoQ10 mRNA表達較模型組降低，UCP2 mRNA表達較模型組降低（p＜0.05），提示OA可通過抑制CoQ10下調(diào)UCP2。經(jīng)si-UCP2/京尼平處理后，模型組中UCP2 mRNA表達沉默（沉默效率＞50%）/下降，細胞內(nèi) ROS表達較正常組明顯上升（p＜0.05），Cyto-C mRNA表達明顯上升（p＜0.05），提示UCP2負調(diào)控RO