立枯絲核菌DsRNA多樣性及其與致病力關(guān)系研究.pdf

1、關(guān)于學位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學位論文，是在導師指導下，獨立進行科學研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導、幫助和做出重要貢獻的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責任由本人承擔。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學有關(guān)保留和使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留和按要求向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印

2、或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文，同時授權(quán)中國科學技術(shù)信息研究所將本學位論文收錄到< 中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并向社會公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名：導師簽名：日2 材料方法????????????????????????????????l 82 ．1 絲核菌菌株的來源與保存????????????????????????1 82 ．1 ．1 絲核菌菌株來源??????????????????

3、??????????1 82 ．1 ．2 絲核菌菌株的保存???????????????????????????2 02 ．2 培養(yǎng)基的制備?????????????????????????????2 l2 ．2 ．1P D A 培養(yǎng)基的制備???????????????????????????2 l2 ．2 ．2L B 培養(yǎng)基的制備???????????????????????????2 l2 ．3 供試菌株的培養(yǎng)??????????

4、??????????????????．．2 l2 ．4d s R N A 的提取??????????????????????????????????????．2 l2 ．4 ．1 實驗器材????????????????．．．．??????????????2 l2 ．4 ．2 提取試劑??????????????????????????????．2 l2 ．4 ．3d s R N A 的粗提取步驟????????????????????

5、??????2 22 ．4 ．4d s l 塒A 的純化????????????????????????????．2 32 ．5d s I ⅢA 序列分析?????????????????????????????．2 32 ．5 ．1 供試菌株及試劑???????????????????????????。2 32 ．5 ．2d s R N A 的部分e D N A 克隆???????????????????????。2 42 ．5 ．3

6、 特異性擴增片段的回收????????????????????????一2 62 ．5 ．4 回收產(chǎn)物的檢測?????????????????????????????2 62 ．5 ．5 特異性擴增片段克隆???????????????????????????2 62 ．5 ．5 ．1 建立克隆反應(yīng)體系??????????????????????????～2 62 ．5 ．5 ．2 轉(zhuǎn)化?????????????????????????

7、????????????????。2 62 ．5 ．5 ．3 單克隆的檢測?????????????????????????????2 72 ．5 ．6 序列測定及分析?????????????????．．．．??????????2 72 ．6d s R N A 多樣性研究????????????????????????????2 72 ．7 拮抗木霉菌株對A G l ．I A 、A G ．3 、A G _ 4 群菌株的生防效果測定??

8、??????2 72 ．7 ．1 平板對峙培養(yǎng)???????????? ?????????????2 73 結(jié)果與分析????????????????????．．．．??????????2 83 ．1 立枯絲核菌A G l - I A 群菌株d s R N A 條帶出現(xiàn)時閥的檢測???????????2 83 ．2 絲核菌d s R N A 多樣性分析?????????～??????????????．2 93 ．2 ．1 玉米紋枯病菌不