牛蒡葉綠原酸提取工藝、分離純化及對(duì)病原真菌的活性研究.pdf

1、綠原酸(chlorogenie acid，CHA)是植物在有氧呼吸過程中產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物，是若干植物的植保素，還具有廣泛且顯著的藥理活性，如抗菌、消炎、抗氧化、清除自由基等，是許多中藥及茶葉質(zhì)量控制的指標(biāo)。CHA的來源主要是從天然植物(包括杜仲葉、金銀花、葵花仔、咖啡和可可樹)中提取。貴州金銀花中CHA含量較穩(wěn)定約5.3-5.7﹪，葵花仔中CHA約1.5-3.3﹪，葵花仁中約2.1-3.5﹪。本課題組首次發(fā)現(xiàn)牛蒡葉中CHA含量較

2、高，是CHA的新來源。鑒于CHA在食品、醫(yī)藥、日用化工等方面的廣泛應(yīng)用，本文主要探討了牛蒡葉CHA的提取純化工藝，并研究了CHA對(duì)幾種真菌的活性。結(jié)果如下： (1)牛蒡葉經(jīng)水和乙醇溶液提取，高效液相法定量，80℃預(yù)處理時(shí)，得CHA的產(chǎn)率分別為0.62﹪和1.22﹪；不經(jīng)80℃預(yù)處理時(shí)，產(chǎn)率分別為0.32﹪和0.58﹪。表明，80℃預(yù)處理可以顯著提高CHA的產(chǎn)率。 在80℃預(yù)處理的基礎(chǔ)上，通過單因素實(shí)驗(yàn)，獲得牛蒡葉CHA的

3、水提取工藝參數(shù)為：pH4.0、固液比1:16、提取溫度40℃、提取次數(shù)1；金銀花水提取工藝參數(shù)為：pH4.0、提取2次、不粉碎。綜合單因素與正交實(shí)驗(yàn)獲牛蒡葉CHA乙醇提取的最佳工藝參數(shù)為：滅活溫度80℃、滅活時(shí)間20min、乙醇濃度70﹪、提取溫度40℃、提取時(shí)間3.5h、固液比為1:20。 (2)牛蒡葉及金銀花經(jīng)水溶液提取，大孔吸附樹脂AB-8柱層析及萃取法分離，得牛蒡葉及金銀花CHA粗品，含量分別為31.14﹪和47.65﹪

4、；經(jīng)乙醇溶液提取，大孔吸附樹脂AB-8兩次柱層析、萃取法分離得高純度的CHA，含量分別為84.69﹪和94.37﹪。牛蒡葉經(jīng)乙醚脫色、乙醇提取，大孔吸附樹脂AB-8柱層析、羥丙基葡聚糖凝膠柱層析、萃取、重結(jié)晶等方法純化，得到白色針狀晶體；經(jīng)薄層層析、熔點(diǎn)測(cè)定、高效液相鑒定為單一組分。 (3)固體培養(yǎng)中CHA能抑制葫蘆刺盤孢、黃瓜尖鏈孢和疫霉三種植物病原真菌的擴(kuò)散，并且能夠抑制葫蘆刺盤孢菌絲的生長(zhǎng)；但液體培養(yǎng)中CHA卻促進(jìn)了葫蘆刺