黃芩苷對頸部交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X2-3受體介導(dǎo)心肌缺血引發(fā)交感興奮反射的作用研究.pdf

1、目的：冠心病、心肌梗死是臨床常見的疾病，心肌缺血時心肌細(xì)胞等釋放大量ATP至細(xì)胞外或細(xì)胞間隙刺激心臟感覺傳入神經(jīng)，加強交感興奮反射活動，導(dǎo)致頸部交感神經(jīng)節(jié)節(jié)后交感傳出神經(jīng)興奮性增強，從而引起心率加快、血壓升高，加重心肌損傷。ATP激活P2X受體產(chǎn)生效應(yīng)。我們實驗室前期研究結(jié)果顯示，頸部交感神經(jīng)節(jié)的P2X3和P2X2/3受體在心肌缺血傷害性感覺傳遞中起重要作用。黃芩苷，是從唇形科植物黃芩的干燥根中提取的一種黃酮類化合物，具有抗炎、抗氧化、

2、抗病毒和抗癌的性質(zhì)。近些年，廣泛的研究證實了黃芩苷對許多疾病具有治療效果，是一種重要的臨床藥物。但是，黃芩苷對心肌損傷的保護機理尚未明確，是否可作用于頸部交感神經(jīng)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞P2X2/3受體影響心肌缺血引發(fā)的交感增強反射對心肌產(chǎn)生保護作用目前尚未見文獻報道。本實驗擬應(yīng)用心肌缺血大鼠模型，觀察黃芩苷處理后大鼠血壓、心率的變化，以及對頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X2/3受體表達的影響，了解黃芩苷在心肌缺血引發(fā)的交感反射中的作用及其可能機制。<

3、br>　　 方法：①結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支建立心肌缺血動物模型，通過心電圖、心肌HE染色觀察黃芩苷對心肌缺血損傷大鼠心功能及形態(tài)的影響；②使用無創(chuàng)法血壓計測量大鼠的血壓、心率，觀察黃芩苷處理的心肌缺血大鼠血壓、心率的變化，并與對照組比較；③檢測血清肌酸激酶(CK-MB)和心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)兩種心肌酶含量，觀察黃芩苷對心肌缺血損傷的作用；④免疫熒光雙標(biāo)法觀察心肌缺血模型組、心肌缺血模型黃芩苷處理組及對照組頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)

4、細(xì)胞及心肌的P2X3、P2X2受體的共表達情況。⑤Western Blot和免疫組織化學(xué)法觀察心肌缺血模型組、心肌缺血模型黃芩苷處理組及對照組的P2X3、P2X2受體的表達情況。⑥RT-PCR觀察心肌缺血模型組、心肌缺血模型黃芩苷處理組及對照組頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及心肌的P2X3、P2X2受體mRNA表達的變化。(7)ELISA的方法檢測各組大鼠血清中腎上腺素濃度的變化；(8)CellTiter-Glo(R)發(fā)光法檢測各組大鼠ATP

5、濃度的變化。
　　 結(jié)果：⑴結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支，心電圖立即出現(xiàn)ST段呈弓背向上抬高，模型組14天后心電圖出現(xiàn)深大的病理性Q波，HE染色顯示明顯出血，心肌萎縮、纖維化甚至出現(xiàn)壞死灶，外觀上可見代償性肥大和大面積的結(jié)締組織增生現(xiàn)象。然而，黃芩苷處理后大鼠心電圖的異常變化和心肌損傷明顯改善。⑵心肌缺血大鼠收縮壓、舒張壓、心率與正常對照組相比均增加(n=5)(p<0.05)。黃芩苷處理組大鼠收縮壓、舒張壓、心率較心肌缺血組均降低(

6、n=5)(p<0.05)。黃芩苷對照組大鼠收縮壓、舒張壓、心率與假手術(shù)組以及正常組間無差異(n=5)(p>0.05)。黃芩苷處理組大鼠收縮壓、心率略高于正常組、假手術(shù)組和黃芩苷對照組(n=5)(p<0.05)。⑶心肌缺血模型組的CK-MB和cTn-T，與對照組比較顯著增加(p<0.05)。黃芩苷處理組CK-MB和cTn-T明顯低于模型組(p<0.05)。正常組、假手術(shù)組、黃芩苷對照組間無顯著性差異(p>0.05)。⑷免疫熒光雙標(biāo)染色結(jié)果

7、顯示，大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和心肌組織存在P2X3受體和P2X2受體的共表達，心肌缺血模型組表達明顯高于對照組，黃芩苷處理心肌缺血后，P2X3受體和P2X2受體表達明顯下降。⑸免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，心肌缺血組大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和心肌組織P2X3受體和P2X2受體表達高于正常組、假手術(shù)組、黃芩苷對照組和黃芩苷處理組(p<0.05)；黃芩苷處理的心肌缺血組的P2X3受體和P2X2受體免疫反應(yīng)性較心肌缺血組下調(diào)(p<0.0

8、5)，但高于其他三個對照組(p<0.05)，假手術(shù)組、黃芩苷對照組與正常組之間無顯著性差異(p>0.05)。⑹RT-PCR結(jié)果顯示，心肌缺血模型組大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和心肌組織P2X3受體和P2X2受體mRNA的表達高于正常組、假手術(shù)組、黃芩苷對照組和黃芩苷處理組，黃芩苷處理心肌缺血后，灰度值明顯降低(p<0.05)。⑺蛋白印跡結(jié)果經(jīng)β-actin標(biāo)化后顯示，心肌缺血組大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和心肌組織P2X3受體和P2X2

9、受體蛋白表達高于正常組、假手術(shù)組、黃芩苷對照組和黃芩苷處理組(p<0.05)；黃芩苷處理的心肌缺血組的P2X3受體和P2X2受體蛋白表達較心肌缺血組減少(p<0.05)；⑻ELISA檢測大鼠血清中腎上腺素濃度結(jié)果顯示，心肌缺血組血清中腎上腺素含量明顯高于正常組、假手術(shù)組、黃芩苷對照組和黃芩苷處理組(p<0.05，F(xiàn)=367.943)；黃芩苷處理組腎上腺素含量較心肌缺血組顯著減少(p<0.05)；正常組、假手術(shù)組、黃芩苷對照組和處理組之間

10、無顯著性差異(p>0.05)。⑼CellTiter-Glo(R)發(fā)光法檢測各組大鼠血清中ATP濃度結(jié)果顯示，心肌缺血組血清中ATP含量高于正常組、假手術(shù)組、黃芩苷對照組和黃芩苷處理組(p<0.05，F(xiàn)=8.954)；黃芩苷處理組ATP含量較心肌缺血組顯著減少(p<0.05)；正常組、假手術(shù)組、黃芩苷對照組和處理組之間無顯著性差異(p>0.05)。
　　 結(jié)論：黃芩苷可以降低心肌缺血大鼠頸部神經(jīng)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞及心肌交感神經(jīng)P2X3和P