晚期NSCLC患者EGFR-TKI治療過程中血清多肽變化及其臨床意義的探索性研究.pdf

1、背景：經(jīng)過大量的全球多中心臨床研究證明，表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor tyrosine kinase inhibitors，EGFR-TKI)已奠定了其在表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)突變型非小細胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)患者中的一線治療地位。然而，大部分EGFR-TKI獲益

2、患者在治療一段時間后會出現(xiàn)繼發(fā)性耐藥導致治療失敗。為突破這一臨床治療瓶頸，需要在不斷闡明EGFR-TKI耐藥機制的基礎上找到更好的指導治療方案的分子學標志物。
　　相對于傳統(tǒng)的腫瘤標志物及基因突變檢測，腫瘤蛋白組學方法構建的差異多肽診斷模型，包含更全面的腫瘤生物學信息。磁珠輔助基質輔助激光解析電離飛行時間質譜（matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight ma

3、ss spectrometry,MALDI-TOF-MS）是目前用于腫瘤蛋白組學分析的核心技術。本研究旨在使用MALDI-TOF儀器從角度觀察NSCLC患者接受EGFR-TKI治療中的血清多肽變化，已期為目前的組織學、血液學基因學檢測結果提供補充和新的視角。
　　第一部分
　　目的：本研究旨在應用基質輔助激光解析離子化-時間飛行質譜儀檢測NSCLC患者在接受EGFR-TKI治療過程中血清多肽的變化并探索其臨床意義。
　

4、　方法：
　　1.收集34例NSCLC患者使用EGFR-TKI治療前、最佳療效時及疾病進展后自身配對的血清樣本102份；
　　2.本研究每例患者采血3次，分別為：(1)入組口服TKI治療前;（2）最佳療效時：臨床評價部分緩解（partial response，PR）或疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）時所留取的血液標本；（3）疾病進展后：臨床評價疾病進展（progressive disease,PD）后所留取的血

5、液標本；
　　3.采用納米磁珠提取血清中的多肽，之后經(jīng)過MALDI-TOF-MS儀器檢測，得到質譜的數(shù)據(jù)使用CPT統(tǒng)計軟件分析得出多肽圖譜；
　　4.將所得的差異多肽峰分別與PFS、OS及EGFR突變情況進行相關性分析。
　　結果:
　　1.34例接受EGFR-TKI治療的患者無完全緩解（complete response，CR）患者，部分緩解（partial response,PR）11例，疾病穩(wěn)定（stabl

6、e disease,SD）23例，中位無進展生存期（progression-free survival，PFS）為8.0個月，中位總生存期OS為11.4個月；
　　2.對TKI治療的三個不同時間點的血清進行質譜檢測，結果顯示三個時間點多肽指紋圖譜均不相同；
　　3.配對分析最佳療效時與基線時質譜數(shù)據(jù)經(jīng)CPT軟件共鑒定出差異多肽峰87個，篩選出兩組間有統(tǒng)計學差異（P＜0.001、AUC≥0.9）的多肽峰1個；疾病進展時與基線時

7、共鑒定出差異多肽峰96個，篩選出兩組間有統(tǒng)計學差異
　?。≒＜0.001、AUC≥0.9）的多肽峰3個；最佳療效時與疾病進展時共鑒定出差異多肽峰115個，篩選出兩組間有統(tǒng)計學差異（P＜0.001、AUC≥0.9）的多肽峰4個。
　　結論:NSCLC患者在EGFR-TKI治療過程中血清蛋白存在著動態(tài)變化，但鑒于本研究的病例數(shù)有限，初步鑒定出的差異多肽與治療獲益及疾病耐藥的具體關系仍需在更大樣本的基礎上進行驗證。
　　第二

8、部分
　　目的：本部分通過使用MALDI-TOF質譜技術分析兩組NSCLC患者接受EGFR-TKI治療前后血清蛋白變化，旨在觀察對于EGFR-TKI反應不同兩組患者出現(xiàn)耐藥后的血清多肽差異的不同。
　　方法：收集49例晚期NSCLC患者EGFR-TKI治療前后自身配對的血清樣本98份，每名患者采血時間為EGFR-TKI治療前即基線和療效評價疾病進展后。統(tǒng)計所有患者PFS后計算出中位PFS，根據(jù)其長短將患者分為短PFS組與長P

9、FS組。采用磁珠磁珠提取血清中的多肽，之后采用MALDI-TOF-MS儀器檢測，得到質譜的數(shù)據(jù)使用CPT統(tǒng)計軟件分析得出多肽圖譜。
　　結果:整體分析49例患者治療前后組自身配對差異多肽，兩組數(shù)據(jù)用統(tǒng)計學軟件得出有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）的差異多肽峰16個。長PFS組的24例樣本中，治療前后組自身配對聚類分析得出兩組數(shù)據(jù)交叉確認值94.44％，區(qū)別率95.45%均為最高。兩組數(shù)據(jù)用統(tǒng)計學軟件分析得出有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）的

10、差異多肽峰20個。短PFS組的25例樣本治療前后組自身配對聚類分析得出兩組數(shù)據(jù)交差驗證值68.10%，識別率87.87%。后使用統(tǒng)計學軟件未找到兩組間有統(tǒng)計學意義的差異多肽峰。
　　結論：本研究發(fā)現(xiàn)在EGFR-TKI治療的長PFS組NSCLC患者中，治療前后可鑒定出差異多肽，推測其與TKI耐藥或疾病進展相關。而在短PFS組中，EGFR-TKI治療前后未鑒定出差異多肽。但鑒于本研究的病例數(shù)有限，需要進一步擴大樣本量對結果進行驗證及深