整合素αVβ3、αVβ5與β1類分子激活狀態(tài)與腫瘤遷移關(guān)系的研究.pdf

1、　　本研究前期工作首次發(fā)現(xiàn)表達(dá)于細(xì)胞表面含有點(diǎn)突變的αⅡbβ3-Cys5Ala、αⅡbβ3-Cys435Ala、αⅡbβ3-Cys560Arg及αⅡbβ3-Cys583Ala不需配體誘導(dǎo)而呈持續(xù)的激活狀態(tài)，它們介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)、配體結(jié)合的能力均高于正常。上述發(fā)現(xiàn)提供了分子內(nèi)Cys5-Cys435、Cys560-Cys583二硫鍵存在的功能性證據(jù)，并闡明二硫鍵參與αⅡbβ3的構(gòu)象調(diào)節(jié)和激活過(guò)程的分子機(jī)理。 　　在前期工作基礎(chǔ)上通過(guò)流式

2、細(xì)胞術(shù)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的整合素αVβ3-WT、αVβ3-Cys5Ala、αVβ3-Cys435Ala、αVβ3-Cys560Arg及αVβ3-Cys583Ala進(jìn)行表達(dá)量及激活狀態(tài)分析，發(fā)現(xiàn)整合素αVβ3-Cys5Ala、αVβ3-Cys435Ala、αVβ3-Cys560Arg及αVβ3-Cys583Ala不需配體誘導(dǎo)而呈持續(xù)的激活狀態(tài)，且CHO-αVβ3-WT和CHO-αVβ3-Cys560Arg表達(dá)量相近。通過(guò)SCID小鼠腫瘤遷移

3、動(dòng)物模型的初步探索發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，10天后，尾靜脈注射CHO細(xì)胞的SCID小鼠肺部表面出現(xiàn)瘤結(jié)，后經(jīng)組織形態(tài)學(xué)分析，肺部?jī)?nèi)部出現(xiàn)典型的腫瘤病灶。但此模型的各項(xiàng)條件有待進(jìn)一步優(yōu)化。 　　為了觀察在整合素其它β亞基中產(chǎn)生相應(yīng)的突變是否也會(huì)出現(xiàn)類似的結(jié)果，通過(guò)對(duì)β3、β1和β5同源性分析，采用PCR方法擴(kuò)增了對(duì)應(yīng)于β3的第5與435位Cys的β1-Cys7Ala、β1-Cys442Ala、β5-Cys5Ala及β5-Cys440Ala突

4、變體片段及β1、β5野生型片段，并構(gòu)建了相應(yīng)的pCDNA3.1C表達(dá)載體。經(jīng)WesternBlot檢測(cè)，成功實(shí)現(xiàn)了β1-WT、β1-Cys7Ala及β1-Cys442Ala在COS7細(xì)胞中的瞬時(shí)表達(dá)。同時(shí)將αV分別與β5野生型及突變體共轉(zhuǎn)染，經(jīng)篩選后，獲得了一批整合素αVβ5野生型及其突變體的穩(wěn)定細(xì)胞株，有待進(jìn)一步流式細(xì)胞術(shù)及WesternBlot分析。 本研究為深入研究整合素激活狀態(tài)在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用進(jìn)而研制具有抑制活性