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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究以豬卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎為實(shí)驗(yàn)材料,采用不同濃度的TSA和5-Aza-Cdr分別對(duì)孤雌激活之后的卵母細(xì)胞進(jìn)行處理,研究其對(duì)胚胎發(fā)育的影響,并檢測(cè)不同處理組中OCT4、Nanog、Bcl-2、BAX在囊胚期的相對(duì)表達(dá)量,以探討表觀遺傳修飾劑處理對(duì)胚胎發(fā)育造成的影響。旨在優(yōu)化核移植胚胎的體外培養(yǎng)程序,培養(yǎng)出更多質(zhì)量更好的胚胎,為進(jìn)一步的研究奠定基礎(chǔ),也為胚胎早期發(fā)育過(guò)程中表觀修飾研究提供一定的佐證。
本研究包括以下主要內(nèi)
2、容:1.采用不同濃度的TSA處理豬卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎24h,研究其對(duì)胚胎發(fā)育的影響。2.采用不同濃度的5-Aza-Cdr處理豬卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎48h,研究其對(duì)胚胎發(fā)育的影響。3.TSA聯(lián)合5-Aza-Cdr對(duì)豬卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎進(jìn)行處理,研究其對(duì)胚胎發(fā)育的影響。4.提取不同處理組的囊胚總RNA,采用Realtime PCR方法檢測(cè)OCT4、Nanog、Bcl-2、BAX基因的相對(duì)表達(dá)量,研究藥物處理對(duì)基因表達(dá)、胚胎發(fā)育能力的影響
3、。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
1.不同濃度的TSA處理對(duì)豬卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎的卵裂率無(wú)顯著影響(p>0.05);40nmol/L TSA處理豬卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎24h,使囊胚率提升至43.8%,囊胚細(xì)胞數(shù)提升至45.1個(gè),與其他各組相比均有顯著差異(p<0.05)。
2.不同濃度的5-Aza-Cdr對(duì)豬卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎的卵裂率及囊胚細(xì)胞數(shù)均無(wú)顯著影響(p>0.05);30nmol/L5-Aza-C
4、dr處理48h囊胚率最高達(dá)到46.3%,與其他各組相比均有顯著差異(p<0.05);且10nmol/L和20nmol/L5-Aza-Cdr處理組的囊胚率也顯著提高,與對(duì)照組相比差異顯著(p<0.05),但不如30nmol/L處理組的高。
3.40nmol/LTSA聯(lián)合不同濃度的5-Aza-Cdr對(duì)豬卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎的卵裂率和囊胚細(xì)胞數(shù)無(wú)顯著影響(p>0.05);40nmol/L TSA+10nmol/L5-Aza-Cd
5、r處理組囊胚率最高為37.5%,與對(duì)照組及其他處理組相比均差異顯著(p<0.05)。
4.40nmol/L TSA處理豬孤雌激活胚胎24h,顯著地提高了多能性相關(guān)基因OCT4及Nanog在囊胚中的相對(duì)表達(dá)量(p<0.05);對(duì)凋亡相關(guān)基因Bcl-2以及BAX的相對(duì)表達(dá)量則基本無(wú)影響,沒(méi)有顯著差異(p>0.05)。
5.30nmol/L5-Aza-Cdr處理豬孤雌激活胚胎48h,顯著提高了Nanog基因在囊胚中
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