5-Aza-CdR對(duì)腎細(xì)胞癌Caki-1細(xì)胞生長(zhǎng)及E-cadherin基因甲基化的影響.pdf

1、目的:研究5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)對(duì)人腎癌Caki-1細(xì)胞株增殖、凋亡的影響,進(jìn)一步分析5-Aza-CdR處理對(duì)E-cadherin基因甲基化狀態(tài)的影響,初步探討腎癌發(fā)病機(jī)制及臨床治療的可行性。
　　 方法:(1)使用不同濃度(10-6、10-5、10-4mol／L)的特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5-Aza-CdR)處理Caki-1腎癌細(xì)胞株；(2)四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞經(jīng)藥物處理前后的

2、生長(zhǎng)活性；(3)甲基化特異性PCR(MSP)法檢測(cè)腎癌細(xì)胞株經(jīng)特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5-Aza-CdR)處理前后E-cadherin基因的甲基化狀態(tài)；(4)蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)5-Aza-CdR處理細(xì)胞前后E-cadherin蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:(1)MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn):特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑NN(5-Aza-CAR)可以明顯抑制Caki-1腎癌細(xì)胞的增殖,而且與藥物濃度及作用時(shí)間在一定范

3、圍內(nèi)成正相關(guān)(p<0.05)；(2)甲基化特異性PCR(MSP)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)未經(jīng)特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5-Aza-CdR)處理組的基因高甲基化,經(jīng)10-6mol／L5-Aza-CdR處理72小時(shí)后,E-cadherin基因啟動(dòng)子區(qū)域高甲基化得到逆轉(zhuǎn)；(3)蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)顯示經(jīng)過(guò)藥物處理72H的腎癌細(xì)胞株Caki-1較未經(jīng)處理的對(duì)照組的E-cadherin蛋白表達(dá)增強(qiáng).
　　 結(jié)論:5-Aza-CdR