重組鵝IL-17對鵝細(xì)小病毒VP3黏膜免疫增強(qiáng)作用的研究.pdf

1、C l a s s i f i e dI n d e x ．S 8 5 3 ．3C o n f i d e n t i a l ( y e s ／n o ) ：n oC o d e ：1 0 2 2 4N O ．1 0 0 0 3 9D i s s e r t a t i o nf o rt h eD o c t o r a lD e g r e eR e c o m b i n a n t G o o s e I L - - 1 7E

2、 n h a n c i n gM u c o s a l I m m u n e R e s p o n s e a g a i n s tG o o s eP a r v o v i r u sV P 3C a n d i d a t e ：W e i S h u a n g S h iS u p e r v i s o r ：P r o f e s s o r W a n g J u n w e iD e g r e eC a t

3、 e g o r y ：D o c t o r o f A g r i c u l t u r eC o l l e g e ：V e t e r i n a r yM e d i c i n eF i r s tl e v e ld i s c i p l i n e ：V e t e r i n a r yS c i e n c e sS e c o n d l e v e ld i s c i p l i n e ：P r e v

4、 e n t i n eV e t e r i n a r yS c i e n c e sH a r b i n C h i n aJ u n e 2 0 1 3東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)博士學(xué)位論文2 ．3 試驗(yàn)二m G o l L ．1 7 和G o C D 4 、G o C D 8 t z 胞外區(qū)原核表達(dá)及多克隆抗體的制備?．2 42 ．3 ．1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建???????????????????????2 42 ．3 ．2 重組蛋

5、白的誘導(dǎo)表達(dá)????????????????????????2 62 ．3 ．3 重組蛋白的純化?????????????????????????2 62 ．3 ．4 多克隆抗體的制備????????????????????????????．．2 62 ．4 試驗(yàn)三m G o l L ．1 7 和m G o l L - 1 7 融合G P V - V P 3 的表達(dá)及活性的測定?????2 72 ．4 ．1 重組轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建?????

6、??????????????????。2 72 ．4 ．2 重組桿粒的獲得及鑒定??????????????????????．2 92 ．4 ．3 重組桿狀病毒的獲得???????????????????????3 02 ．4 ．4S D S ．P ：A G E 及W e s t e r nb l o t 檢測重組蛋白I L ．1 7 和V P 3 ?????????．3 l2 ．4 ．5 純化與復(fù)性??????????????????

7、?????????3 22 ．4 ．6m G o l L ．1 7 和m G o i L l 7 ．V P 3 在鵝胚成纖維細(xì)胞上的活性測定??????．3 32 ．5 試驗(yàn)四m G o l L ．1 7 黏膜佐劑效應(yīng)的評(píng)估?????????????????3 42 ．5 ．1 試驗(yàn)動(dòng)物分組及免疫策略????????????????????．．3 42 ．5 ．2 體液免疫評(píng)估?????????????????????????．3 42

8、 ．5 ．3 外周血淋巴細(xì)胞中C D 4 和C D 8 細(xì)胞的檢測?????????????3 62 ．5 ．4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析???????????????????????????．．3 63 結(jié)果與分析??????????????????????????????????3 73 ．1 東北白鵝胸腺R N A 的提取及雙鏈e D N A 的擴(kuò)增?????????????．3 73 ．2 東北白鵝I L ．1 7 、C D 4 和C D

9、8 a 的克隆及序列分析????????????3 73 ．2 ．1 東北自鵝I L ．1 7 、C D 4 和C D 8 a 的克隆??????????????????．3 73 ．2 ．2 目的片段與克隆載體的連接????????????????????3 73 ．2 ．3 序列分析?????????????????????????????3 83 ．3m G o l L ．1 7 和C D 4 、C D 8 a 胞外區(qū)的原核表達(dá)?

10、????????????????一4 73 ．3 ．1m G o l L ．17 和C D 4 、C D 8 a 胞外區(qū)原核表達(dá)P C R ????????????4 73 ．3 ．2m G o l L ．1 7 、C D 4 和C D 8 a 胞外區(qū)原核表達(dá)載體的構(gòu)建?????????．4 83 ．3 ．3m G o l L ．1 7 和C D 4 、C D S a 胞外區(qū)蛋白的純化和多抗的制備???????一4 93 ．4m G o

11、 l L ．1 7 和m G o l L ．1 7 與G P v - V P 3 融合表達(dá)及其活性的測定???????．5 33 ．4 ．1 m G o l L ．1 7 和I L ．1 7 與G P V o V P 3 融合表達(dá)重組轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建??????5 33 ．4 ．2 重組桿粒的獲得及P C R 鑒定????????????????????????一5 53 ．4 ．3 重組桿粒轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后的細(xì)胞病變圖??????????

12、??????5 63 ．4 ．4 重組蛋白的S D S ．P A G E 和W e s t e r n b l o t 檢測???????????????5 63 ．4 ．5 重組蛋白的純化和復(fù)性??????????????????????一5 83 ．4 ．6m G o l L ．1 7 和m G o I L l 7 ．V P 3 在鵝胚成纖維細(xì)胞上的活性測定??????．6 03 ．5 東北白鵝I L ．1 7 黏膜佐劑效應(yīng)的評(píng)估?