熱休克蛋白70抑制劑PES在細(xì)胞炎癥反應(yīng)及小鼠心肌缺血再灌注損傷中的影響作用.pdf

1、背景：PES(2-phenyl ethane sulfonamide)是由George等在Cell雜志上2009年新報道的一種小分子，它能選擇性的抑制熱休克蛋白70(Heat Shock Protein70，HSP70)的蛋白質(zhì)功能，在治療癌癥方面有明顯的功效。有關(guān)PES的研究和綜述目前國內(nèi)外僅見兩篇文獻(xiàn)報道。心肌缺血再灌注損傷是最常見的炎癥反應(yīng)，我們前期的研究表明HSP90及其抑制劑在iNOS介導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)及小鼠心肌缺血再灌注損傷

2、中發(fā)揮著重要的作用。HSP70是HSP家族中的最重要的一員，然而，關(guān)于HSP70抑制劑PES與炎癥反應(yīng)的關(guān)系國內(nèi)外尚未見文獻(xiàn)報道，其對炎癥反應(yīng)的影響作用及其可能的作用機(jī)制也尚未明確。
　　 目的：探討熱休克蛋白70抑制劑PES對LPS/IFN-γ誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞一氧化氮(NO)生成及誘生型一氧化氮合酶(iNOS)表達(dá)的影響作用及其可能的作用機(jī)制；觀察熱休克蛋白70抑制劑PES對小鼠缺血再灌注損傷心肌梗死面積的影

3、響作用。
　　 方法：采用LPS/IFN-γ誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞株建立細(xì)胞炎癥反應(yīng)模型，Griess試劑法測定一氧化氮(NO)釋放量；Western-Blot法測定iNOS等蛋白表達(dá)；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)分析iNOS mRNA表達(dá)改變；ELISA方法測定STAT1 DNA結(jié)合活性；HSP70 siRNA轉(zhuǎn)染小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞檢測iNOS等蛋白表達(dá)；建立小鼠缺血再灌注心肌損傷模型檢測心肌梗死面

4、積的變化。
　　 結(jié)果：熱休克蛋白70抑制劑PES在8-12小時可抑制LPS/IFN-γ誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞NO的釋放(P<0.05)；PES在8-12小時可下調(diào)LPS/IFN-γ誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞iNOS蛋白和mRNA表達(dá)(P<0.05)；PES在30分鐘時可抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞IκB降解和磷酸化IKK(PIKK)蛋白的表達(dá)(P<0.05)；PES在0-4小時可抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞

5、Akt磷酸化的表達(dá)(P<0.05)；PES早期并未通過Akt信號通路發(fā)揮抑制iNOS表達(dá)的作用；PES早期未抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞磷酸化STAT1的表達(dá)(P>0.05)；PES未影響IFN-γ誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞iNOS mRNA的穩(wěn)定性；PES在30分鐘時可抑制IFN-γ誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞核內(nèi)IRF-1蛋白表達(dá)發(fā)揮作用(P<0.05)；PES可減少小鼠缺血再灌注損傷心肌梗死面積(P<0.05)。