光子晶體在ITP患者血小板膜糖蛋白特異性抗體多元分析中的應用.pdf

1、第一部分光子晶體水凝膠微球的制備及工作條件優(yōu)化
　　背景：多元分析技術在生物科學領域得到了廣泛的應用，在基因序列和蛋白質功能分析方面已取得了相當的成就。其中基于流動編碼載體的液相芯片技術具有高通量，使用靈活，靈敏度高，重復性好的特點，是當今研究的熱點。東南大學國家生物電子重點實驗室已將該技術應用于多種癌癥標志物的并行檢測，取了一定成就同時仍存在部分問題。本論文依據已成熟的技術進行基于光子晶體微陣列的多元檢測平臺的優(yōu)化，并解決檢測中

2、存在的問題。
　　方法：探索和優(yōu)化制備高質量光子晶體水凝膠微球的條件，并在優(yōu)化條件下生產出了四種光子晶體編碼膠體晶體微球。選取人IgG作為待檢靶蛋白,在瓊脂糖水凝膠上首先固定羊抗人IgG抗體,經過洗滌、封閉后，依次加入標準抗原、熒光標記的檢測抗體,分別孵育、洗滌后,倒置熒光顯微鏡獲取圖像及熒光強度，根據熒光強度優(yōu)化最佳瓊脂糖水凝膠濃度、固定時間、氫氧化鈉濃度、環(huán)氧氯丙烷濃度以及抗體濃度。
　　結果：在水凝膠濃度4％、NaOH

3、濃度1.0mol/L、環(huán)氧氯丙烷濃度10%、反應時間3h、抗體濃度0.01mg/ml的條件下,熒光強度達到最強，即抗體修飾密度達到最大。
　　結論：本研究優(yōu)化了以瓊脂糖水凝膠包裹的光子晶體為載體的抗體修飾反應條件,提高了光子晶體微陣列檢測平臺的靈敏度。
　　第二部分構建光子晶體微陣列進行血小板特異性抗體多元分析
　　背景：血小板膜糖蛋白特異性抗體是由于機體免疫系統(tǒng)功能紊亂而產生的針對血小板膜糖蛋白的抗體，是引起病人血小

4、板減少及巨核細胞成熟障礙的重要原因，可導致多種臨床病癥，如原發(fā)免疫性血小板減少癥，輸血后紫癜，血小板輸注無效，移植后排斥反應及輸血后急性呼吸窘迫等等。血小板減少的臨床表現為廣泛皮膚、黏膜或內臟出血?，F階段診斷主要依靠病史、臨床表現、實驗室檢查和對其它原因的排除。
　　方法：根據光子晶體水凝膠微球的光學特性，抗原-抗體的結合反應原理，在此基礎上提出應用光子晶體微球微陣列多元檢測血清中血小板特異性抗體的方案，并應用單克隆抗體俘獲特異性

5、抗原法做為對照方法。初步構建敏感性高、特異性強、快速的多元檢測血小板特異性抗體的光子晶體微陣列檢測平臺。
　　結果：應用包被單克隆抗體的懸浮微陣列進行多元分析，檢測抗GPIIb/IIIa抗體的敏感性高于單克隆抗體俘獲特異性抗原（MAIPA組）（P<0.05）；檢測抗 GPIb/IV抗體的敏感性與MAIPA相當（P>0.05）；多元分析的特異性與MAIPA相當（P>0.05）。多元分析的多種單克隆抗體間不存在交叉反應。包被血小板膜糖