人骨軟骨組織冷凍保存效果及組織庫建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   按照AATB標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)用慢速梯度降溫冷凍保存骨軟骨標(biāo)本,觀察保存后軟骨細胞存活率及細胞活性的變化,并建立骨軟骨組織庫,初步應(yīng)用于臨床,為骨軟骨移植物臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
   方法:
   年齡在15-45歲之間的捐獻者(山東省千佛山醫(yī)院臨床腦死亡的病人,無關(guān)節(jié)病損),死前做血尿及其他體液常規(guī)檢查符合捐獻條件,于死亡后12小時內(nèi),無菌條件下應(yīng)用Arthrex關(guān)節(jié)軟骨移植器械垂直于膝關(guān)節(jié)股骨髁與脛骨平臺關(guān)

2、節(jié)面切取直徑為6mm、8mm、10mm,骨柱長約10-15mm的圓柱形骨軟骨塊,共200枚。經(jīng)10%DMSO處理后無菌獨立包裝,行慢速梯度降溫至-80℃,保存入-80℃深低溫冰箱,建立骨軟骨組織庫。分別在保存1個月、3個月、6個月、1年時隨機抽取10枚標(biāo)本行胎盤藍染色檢測軟骨細胞存活率,MTT法檢測軟骨細胞活性;10枚做組織學(xué)和組織化學(xué)染色觀察軟骨細胞組織形態(tài)和代謝活性變化。將各時間段保存標(biāo)本的檢測結(jié)果與新鮮組對照,評價保存效果,并在冷

3、凍保存早期選取6枚標(biāo)本應(yīng)用于臨床治療3例患者膝關(guān)節(jié)軟骨缺損,平均隨訪2個月,評價臨床效果。
   結(jié)果:
   1、軟骨細胞存活率的變化新鮮對照組軟骨細胞存活率為94.80±4.59,應(yīng)用梯度降溫冷凍保存1個月、3個月、6個月、1年時,細胞存活率分別為66.95±9.98、58.11±9.11、43.7±8.37、29.21±5.03,實驗組與新鮮對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),各保存時間點實驗組組間兩兩比較均

4、有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。即深低溫冷凍保存對軟骨細胞存活率的影響具有動態(tài)時間依從性。
   2、關(guān)節(jié)軟骨PG的變化新鮮對照組關(guān)節(jié)軟骨PG含量豐富,番紅O染色為紅橙色,經(jīng)梯度降溫冷凍保存1個月、3個月、6個月、1年時,番紅O染色逐漸變淺,各組淺、中、深層平均IOD值(表1),各實驗組與新鮮對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),各保存時間點實驗組組間兩兩比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),即深低溫冷凍保存對軟骨PG的影響有時

5、間依從性。
   3、軟骨細胞活性新鮮對照組OD值為0.65±0.03,經(jīng)階梯降溫冷凍保存1個月、3個月、6個月、1年時,OD值分別為0.42±0.04、0.29±0.02、0.21±0.03、0.16±0.04,各實驗組與新鮮對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),各保存時間點實驗組組間兩兩比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),即深低溫冷凍保存對軟骨細胞活性的影響有時間依從性。
   4、無菌操作取材的骨軟骨標(biāo)本經(jīng)慢速

6、梯度降溫至-80℃冷凍保存1月-1年,包裝完好,各保存時間點隨機抽取標(biāo)本行細菌培養(yǎng)檢測結(jié)果均為陰性;臨床應(yīng)用冷凍保存的6枚標(biāo)本治療3例關(guān)節(jié)軟骨缺損,術(shù)后MRI檢查均可見移植骨與宿主骨融合,Brittberg-Peterson功能評分較術(shù)前明顯降低,顯示早期移植效果滿意。
   結(jié)論:
   1、深低溫保存對關(guān)節(jié)軟骨活性的影響具有動態(tài)的時間依從性。隨著保存時間的延長,關(guān)節(jié)軟骨活性會逐漸降低;低溫導(dǎo)致軟骨被凍傷是客觀存在的。

7、
   2、梯度降溫深低溫冷凍保存可操作性強,能使骨軟骨移植物細胞存活時間延長,建立骨軟骨組織庫具有可行性。
   3、應(yīng)用組織庫保存的骨軟骨移植物治療關(guān)節(jié)軟骨缺損手術(shù)取得了初步臨床效果。
   意義:青少年運動傷導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨損傷的治療一直是個難題,骨軟骨移植是公認的較為理想的治療方法。由于供體來源的有限,如何長時間的保存有活性的軟骨移植物成為研究者關(guān)注的焦點。目前國外已開展了冷凍保存骨軟骨組織方法與臨床應(yīng)用研究

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