小鼠卵巢組織冷凍保存方法的初步研究.pdf

1、腫瘤患者經(jīng)過手術(shù)或放化療后生殖功能會受到明顯影響，已經(jīng)有多種方法能夠?qū)@些患者的性腺功能進行保護，而在卵巢功能受損前進行卵巢組織的冷凍更適合于青春期前卵泡尚未發(fā)育成熟的患者、不能延誤腫瘤治療、激素治療或促排卵有禁忌以及有切除雙側(cè)附件風(fēng)險的女性患者，因此具有很大的潛在意義。卵巢皮質(zhì)內(nèi)具有大量的卵泡儲備，原始卵泡因體積小、代謝率低等特征能夠耐受低溫?fù)p傷，在皮質(zhì)冷凍中可以相對多地完好保存。目前的卵巢組織冷凍保存尚處于研究階段。從冷凍方法上講，

2、可以分為慢速冷凍和玻璃化冷凍。慢速冷凍是傳統(tǒng)的冷凍方法，采用低濃度的冷凍保護劑從而降低細(xì)胞毒性，玻璃化冷凍因為降溫迅速，組織或細(xì)胞與冷凍劑接觸時間短，則需要更高濃度的冷凍保護劑和更快的降溫速率。目前卵巢組織的冷凍方案尚無統(tǒng)一意見，但多數(shù)取得臨床活產(chǎn)的研究采用慢速冷凍。而玻璃化冷凍因其較好的胚胎/卵母細(xì)胞存活率、操作耗時短、無需特殊儀器而備受青睞，也逐步應(yīng)用至卵巢組織冷凍的研究中。
　　目的:比較不同冷凍方案對小鼠卵巢組織的保存效果

3、。
　　方法:25只六周齡ICR雌鼠，取卵巢皮質(zhì)切塊后，隨機分成5組:新鮮（對照）組、二甲基亞砜慢速冷凍(A)組、丙二醇慢速冷凍(B)組、冷凍管玻璃化冷凍5min(C)組及冷凍管玻璃化冷凍8min(D)組。分別進行卵巢組織冷凍復(fù)蘇、復(fù)蘇后體外培養(yǎng)兩周以及復(fù)蘇后進行同種體內(nèi)移植，并飼養(yǎng)兩周。比較三種情況下各組的原始卵泡形態(tài)正常率;卵巢組織中的原始卵泡凋亡情況;比較各體外培養(yǎng)組培養(yǎng)液中以及各復(fù)蘇移植后小鼠靜脈血中雌二醇(E2)水平。<

4、br>　　結(jié)果:復(fù)蘇后，與對照組相比， C、D組原始卵泡形態(tài)正常率顯著降低(P＜0.001)，A、B組無顯著性差異。體外培養(yǎng)兩周后及復(fù)蘇移植飼養(yǎng)兩周后，各組原始卵泡形態(tài)正常率無顯著差異（P＞0.1）。細(xì)胞凋亡檢測顯示，三種情況下卵泡凋亡率均無顯著性差異。體外培養(yǎng)過程中，各組培養(yǎng)液E2水平均不斷增加（P＜0.001），A、B兩組的E2平均濃度顯著高于對照組及C、D兩組(P＜0.05），對照組與C組及D組差異無顯著性(P＞0.05)。移植飼