氟喹諾酮耐藥志賀菌臨床分離株AcrAB-TolC外排泵表達(dá)水平與耐藥關(guān)系的研究.pdf

1、目的：鑒定并掌握近七年天津市部分醫(yī)院臨床分離志賀菌株的血清型分布及其主要血清群、型及亞型；分析天津市部分醫(yī)院志賀菌臨床分離株對(duì)常用17種抗菌藥物的敏感情況；研究對(duì)氟喹諾酮耐藥的志賀菌臨床分離株，其AcrAB-TolC外排泵mRNA水平的表達(dá)與菌株耐藥程度的相關(guān)性。
　　方法：2009年-2015年，本研究所于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院、天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院、天津市兒童醫(yī)院三家三甲醫(yī)院腸道門診非重復(fù)患者糞便收集獲得的志賀菌臨床株。1、采用生

2、化鑒定及血清凝集法，對(duì)所收集的菌株進(jìn)行種（屬）鑒定并確定血清群（型）,明確近七年天津部分醫(yī)院志賀菌臨床株流行的主要血清型。2、利用萘啶酸、亞胺培南、頭孢他啶等17種抗菌藥物進(jìn)行 K-B紙片擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)志賀菌臨床分離株的藥物敏感水平；通過包括萘啶酸、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星和諾氟沙星在內(nèi)的5種抗生素篩選多重氟喹諾酮耐藥（對(duì)3種或者3中以上的氟喹諾酮類抗生素耐藥）菌株，共計(jì)9株命為耐藥組，其菌株編號(hào)依次為：F2、N8、F44、157

3、、187、368、1113、3171、3327；隨機(jī)挑選氟喹諾酮敏感菌株，9株命為敏感組，其菌株編號(hào)依次為：F13、1、22、174、186、377、1506、3283、3326。3、對(duì)上述耐藥組與敏感組志賀菌株，借用三步法進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)AcrAB-TolC外排泵基因mRNA水平的表達(dá)量，并使用SPSS17.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：⑴菌株分型：經(jīng)常規(guī)生物化學(xué)、血清凝集實(shí)驗(yàn)鑒定，192株志賀菌臨

4、床分離株中，宋內(nèi)志賀菌（D群）98株（51％）；福氏志賀菌（B群），83株（43%）；鮑氏志賀菌（C群）和痢疾桿菌（A群）分別為9株和2株。⑵藥物敏感試驗(yàn)：192株志賀菌臨床分離株的多重耐藥率達(dá)95%。對(duì)第一代喹諾酮類（萘啶酸）耐藥率為97%，對(duì)于其他抗生素的耐藥率降低。其中，四環(huán)素、氨芐西林及復(fù)方新諾明的耐藥率依次為78%、77%、73%。對(duì)三代頭孢菌素的耐藥率較低（小于5%），且未見頭孢哌酮舒巴坦以及亞胺培南耐藥菌株。3、實(shí)時(shí)熒光定

5、量RT-PCR：耐藥組中acrA基因的mRNA表達(dá)水平高于敏感組志賀菌株，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；耐藥組中acrB、tolC基因的mRNA表達(dá)水平均值高于敏感組志賀菌株，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：2009年-2015年天津市三家三甲醫(yī)院臨床分離志賀菌株主要血清型為宋內(nèi)志賀菌,其次為福氏志賀菌；2015年分離的鮑氏志賀菌和痢疾志賀菌株依次為9株、2株。志賀菌株對(duì)臨床17種抗生素耐藥率較高,多重耐藥菌株