內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響.pdf

1、研究背景和目的:
　　多種應(yīng)激因素如營(yíng)養(yǎng)剝奪、缺血缺氧、鈣代謝障礙及蛋白質(zhì)糖基化受阻等均可導(dǎo)致蛋白質(zhì)折疊障礙，未折疊蛋白質(zhì)堆積于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，細(xì)胞的這種生存狀態(tài)稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress,ERS）。由此誘發(fā)細(xì)胞發(fā)生一系列自我保護(hù)性反應(yīng)，稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)或未折疊蛋白反應(yīng)（ unfolded protein response,UPR)。近年來，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)ERS在腫瘤組織中普遍存在。它作為細(xì)胞

2、的一種自我保護(hù)性反應(yīng)，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，并參與調(diào)控腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。但目前 ERS與胃癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，尚報(bào)道甚少。本課題擬以胃癌細(xì)胞系 SGC7901和 BGC823作為研究對(duì)象，使用 ERS經(jīng)典誘導(dǎo)劑衣霉素（tunicamycin,TM)處理胃癌細(xì)胞，誘導(dǎo)其產(chǎn)生ERS，探討ERS對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響。
　　方法：
　　1.ERS細(xì)胞模型的建立 ERS誘導(dǎo)劑衣霉素（5μg/ml）分別處理胃癌細(xì)胞系SGC7901

3、和BGC823后，于處理后0h、12h、24h及36h提取總蛋白，采用Western blot技術(shù)檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白GRP78的表達(dá)。
　　2.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和 Transwell實(shí)驗(yàn)衣霉素（5μg/ml）分別處理 SGC7901和 BGC8230h、12h、24h及36h后，使用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分別觀察兩種胃癌細(xì)胞在各時(shí)間點(diǎn)的劃痕愈合度，使用 Transwell法分別檢測(cè)兩種胃癌細(xì)胞在各時(shí)間點(diǎn)遷移或侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)。
　　

4、3.檢測(cè) ERS對(duì)侵襲遷移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響以胃癌細(xì)胞系 SGC7901和BGC823為處理對(duì)象，衣霉素處理12h、24h、36h后，Western blot檢測(cè)侵襲遷移相關(guān)蛋白MMP-9和VEGF蛋白的變化。
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)， P＜0.05為差異有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1.衣霉素可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞系SGC7901和BGC823發(fā)生ERS與0

5、h相比，衣霉素處理胃癌細(xì)胞系SGC7901和BGC823，12h、24h及36h后，GRP78在蛋白水平的表達(dá)量均明顯提高，具有時(shí)間依賴性（P<0.05)。
　　2.ERS對(duì)胃癌細(xì)胞系SGC7901和BGC823侵襲遷移能力的影響與對(duì)照組相比，衣霉素處理胃癌細(xì)胞系SGC7901和BGC82312h、24h及36h后，胃癌細(xì)胞的侵襲遷移能力均有明顯的增加,且具有時(shí)間依賴性（P<0.05)。
　　3.ERS對(duì)侵襲遷移相關(guān)蛋白表達(dá)