雷公藤多苷對貝伐珠單抗誘導(dǎo)的小鼠蛋白尿的影響及其相關(guān)機制的研究.pdf

1、背景：
　　在過去十年中，抗血管形成治療已廣泛應(yīng)用于臨床，貝伐珠單抗（bevacizumab，BEV)為新型抗血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的人源化單克隆抗體，通過選擇性與 VEGF結(jié)合，阻止 VEGF與其受體的結(jié)合，阻斷下游信號通道，起到抗新生血管形成的作用，進而抑制腫瘤生長。蛋白尿是貝伐珠單抗不良反應(yīng)之一，可導(dǎo)致抗血管形成治療中斷或延遲，嚴(yán)重蛋白尿患者則需要永

2、久停止抗血管生成治療，嚴(yán)重影響臨床療效。多項研究表明雷公藤多苷片（Tripterysium wilfordii polyglucoside，TWP)可以通過保護足細(xì)胞改善糖尿病腎病的蛋白尿，在中-重度蛋白尿的治療中，發(fā)揮獨特優(yōu)勢，具有作用時間短、起效速度快、持續(xù)有效等特點。本研究觀察 TWP對貝伐珠單抗誘導(dǎo)小鼠腎損傷的保護作用并探討其作用機制。
　　目的：
　　研究血管形成抑制劑之一貝伐珠單抗誘導(dǎo)小鼠蛋白尿的形成機制，探索雷

3、公藤對貝伐珠單抗誘導(dǎo)的小鼠蛋白尿的干預(yù)作用及可能作用機制。
　　方法：
　　30只健康清潔級小鼠分為5組：Control組、BEV組(貝伐珠單抗60mg/kg·w-1 i.v)、BEV+TWP1(BEV60mg/kg· w-1 i.v+TWP4mg/kg/d-1)、BEV+TWP2(BEV60mg/kg· w-1 i.v+TWP8mg/kg/d-1)、BEV+TWP3(BEV60mg/kg· w-1 i.v+TWP16mg/

4、kg/d-1)，Control組給予尾靜脈注射相同體積的生理鹽水。4周末收集小鼠24-h尿液，檢測尿蛋白總量；收集小鼠血液標(biāo)本，檢測血液中血肌酐（CREA）、尿素氮（BUN）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）等生化指標(biāo)。最后處死小鼠，留取腎組織，HE染色方法檢測腎組織病理變化，電鏡方法檢測足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，免疫組化、Western blot方法檢測腎組織VEGF、podocin、nephrin蛋白表達(dá)，quantitative

5、PCR方法檢測VEGF mRNA、podocin mRNA、nephrin mRNA表達(dá)；
　　結(jié)果：
　　BEV組24-h尿蛋白量顯著高于Control組；與BEV組比較，BEV+TWP2、BEV-TWP3組24-h尿蛋白量明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；BEV+TWP124-h尿蛋白量無明顯差異。5組AST、ALT、BUN、GREA無明顯差異（P>0.05）。腎組織病理變化：Control組小鼠腎組織結(jié)構(gòu)正常

6、；BEV+TWP1組未見明顯病理改變；BEV組小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞萎縮，呈空泡狀結(jié)構(gòu)改變；BEV+TWP2、BEV-TWP3組腎小球結(jié)構(gòu)較 BEV組明顯改善。電鏡下觀察到 Control組小鼠腎組織呈正常結(jié)構(gòu)足細(xì)胞，而BEV組足細(xì)胞廣泛融合；BEV+TWP2、BEV-TWP3組小鼠足細(xì)胞較BEV組有明顯改善。免疫組化結(jié)果顯示Control組、BEV+TWP2、BEV-TWP3組小鼠腎組織VEGF的表達(dá)呈中、強陽性，BEV組小鼠呈弱陽性或陰

7、性；在VEGF、nephrin、podocin蛋白及mRNA表達(dá)量方面，BEV組較Control組顯著下降，BEV+TWP2、BEV-TWP3較BEV組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；BEV+TWP1組無明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　貝伐珠單抗下調(diào) VEGF、nephrin、podocin蛋白及 mRNA表達(dá)，從而損傷腎小球濾過膜，導(dǎo)致蛋白尿。而雷公藤多苷片具有促進足細(xì)胞修復(fù)、減少蛋白尿的作用，其部