胺基柔性載體固定木瓜蛋白酶的研究.pdf

1、本文在傳統(tǒng)的酶固定化模型基礎(chǔ)上提出了酶的柔性固定化模型:在固定化載體上,接上一些有足夠長度的且是親水的分子鏈("柔性鏈"),以制備"柔性載體,而后再將酶與該柔性載體進(jìn)行共價結(jié)合.該模型的特點就在于可以避免固定化過程中酶與載體的剛性碰撞,以維持酶的構(gòu)象,提高固定化酶的活性和穩(wěn)定性.實驗中,我們主要研究了柔性固定化模型中胺類柔性載體的制備,以及用所制備的胺類柔性載體對木瓜蛋白酶進(jìn)行的柔性固定化.首先,本文概括了國內(nèi)外酶固定化技術(shù)發(fā)展?fàn)顩r,總

2、結(jié)了傳統(tǒng)的酶固定化方法、原則及相關(guān)載體性能.并在此基礎(chǔ)上,提出了柔性固定化模型及本課題的研究目的和意義.其次,本文以傅克反應(yīng)制備的氯乙酰聚苯乙烯微球作為原料樹脂,研究了該原料樹脂與不同分子量的胺制備胺類柔性載體(胺基樹脂)的反應(yīng).具體討論了不同實驗條件,如分散時間、分散溶劑、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、原料樹脂的取代度和粒徑以及催化劑等對胺基樹脂增重率的影響,并通過紅外光譜以及元素分析對其進(jìn)行了表征.實驗結(jié)果表明:用DMF作溶劑分散原料樹脂的效

3、果優(yōu)于其他溶劑;分散時間至少需要8.5h;胺化反應(yīng)的最佳溫度為80℃;四乙烯五胺的用量超過4ml,增重率可達(dá)最大;由粒徑小、取代度低的原料樹脂制備的胺基樹脂,其增重率更為接近理論增重率.通過以上條件的優(yōu)化,可以獲得增重率為21.8﹪,N﹪=8.7﹪,擔(dān)載量為6.2mmol/g-NH2的胺基樹脂.此外,由殘留氯含量的測定,我們還發(fā)現(xiàn),原料樹脂的氯不僅與伯胺還與仲胺反應(yīng).第三,本文初步研究了胺類柔性載體對木瓜蛋白酶的固定化.實驗顯示,在采用