雌激素受體α甲基化與腎虛型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥關(guān)系及補腎中藥的干預(yù)研究.pdf

1、目的:
　　探究骨組織中雌激素受體α(ERα)基因啟動子甲基化與腎虛型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(PMOP)的關(guān)系以及補腎中藥干預(yù)對成骨細胞內(nèi)ERα基因啟動子甲基化、細胞增殖及分化的影響。
　　方法:
　　(1)收集行髖、膝手術(shù)的PMOP女性患者20例作為觀察組，行髖、膝手術(shù)的非PMOP女性患者20例作為對照組。通過問卷調(diào)查和體檢的方法收集患者的一般資料和體格資料，應(yīng)用雙能X線骨密度分析儀檢測患者腰椎2-4骨密度，應(yīng)用甲基化PC

2、R(MSP)檢測患者骨組織中ERα基因啟動子甲基化情況。統(tǒng)計學(xué)分析觀察組與對照組患者骨密度、骨組織中ERα基因啟動子甲基化差異及骨密度與ERα基因啟動子甲基化程度的相關(guān)性。
　　(2)二次酶消化法分離培養(yǎng)大鼠原代成骨細胞，用六味地黃丸和金匱腎氣丸分別以10、50、100 ng/μL的濃度干預(yù)處理。MSP法檢測各組細胞內(nèi)ERα基因啟動子甲基化狀況，RT-PCR與WB法檢測補腎中藥干預(yù)后ERα mRNA和蛋白表達變化，CCK8試劑盒檢

3、測細胞增殖活性，ALP試劑盒檢測堿性磷酸酶(ALP)表達，細胞免疫組織化學(xué)染色法檢測成骨細胞標志物膠原Ⅰ和骨保護素的表達變化，WB法檢測影響成骨細胞增殖分化的信號通路關(guān)鍵分子AMPK和β-catenin的表達變化。
　　結(jié)果:
　　(1)與正常對照組患者相比，觀察組患者骨密度值降低、骨組織內(nèi)ERα基因啟動子甲基化增加，統(tǒng)計學(xué)分析表明，患者骨密度與ERα基因啟動子甲基化程度呈現(xiàn)負相關(guān)性。
　　(2)補腎中藥干預(yù)能夠抑制成

4、骨細胞內(nèi)ERα基因啟動子甲基化并增加ERαmRNA和蛋白表達，其中，金匱腎氣丸的作用更為明顯。應(yīng)用CCK8試劑盒檢測細胞增殖結(jié)果顯示:六味地黃丸干預(yù)后，成骨細胞的增殖活性沒有明顯變化;金匱腎氣丸以50、100 ng/μL的濃度干預(yù)處理48 h時，能夠顯著地增加細胞增殖活性。同時，細胞組化檢測結(jié)果顯示:對于成骨細胞早期分化標志物ALP與膠原Ⅰ的表達，六味地黃丸以100 ng/μL濃度干預(yù)時能夠增加其表達，金匱腎氣丸以50 ng/μL和10

5、0 ng/μL濃度干預(yù)處理時能夠顯著增加其表達，且金匱腎氣丸促成骨細胞早期分化效果更為明顯。此外，WB檢測補腎中藥干預(yù)對影響成骨細胞增殖分化的信號通路關(guān)鍵分子表達變化的結(jié)果顯示金匱腎氣丸干預(yù)處理能夠降低成骨細胞內(nèi)p-AMPK蛋白的表達，增加Wnt通路中β-catenin蛋白的表達。
　　結(jié)論:
　　患者骨密度值與骨組織內(nèi)ERα基因啟動子甲基化程度呈負相關(guān);補腎中藥金匱腎氣丸能夠顯著抑制ERα基因啟動子甲基化及增加ERα mR