動(dòng)脈粥樣硬化中高遷移率族蛋白B1與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：將動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)患者和健康人作為研究對(duì)象，檢測(cè)兩種健康狀況的外周血中促炎性細(xì)胞因子和抑炎性細(xì)胞因子含量的變化，以及研究對(duì)象中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th17細(xì)胞含量的變化，研究在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中高遷移率族蛋白-1（high mobility group box1 protein,HMGB-1）和Th17/Treg的平衡與AS形成的相互關(guān)系，探討AS的致病因素，尋找可能存在的治療靶點(diǎn)，并為防治

2、動(dòng)脈粥樣硬化以及動(dòng)脈粥樣硬化所致的并發(fā)癥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)設(shè)立對(duì)照組和AS組，檢測(cè)健康人和動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血中高遷移率族蛋白-1(HMGB-1)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（T regulatory cell,Treg）以及Th17細(xì)胞之間的含量變化，(1)采用 Ficoll密度梯度離心法分別將動(dòng)脈粥樣硬化患者和健康人外周血分離得到人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）。(2)將分離出的單個(gè)核細(xì)胞采用磁珠分選法分選出調(diào)節(jié)性T

3、細(xì)胞（Tregs）。(3)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)磁珠分選所得CD4+T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞的純度。(4)將不同濃度的 HMGB-1和 Treg細(xì)胞共培養(yǎng)，研究HMGB-1對(duì)Treg細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化，檢測(cè)封閉TLR4受體和不封閉TLR4受體時(shí)培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子TGF-β1、IL-10含量的變化。(5)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法分別檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化患者和健康人血清中的細(xì)胞因子TGF-β1、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23和HMGB-1

4、的含量。（6）用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所得數(shù)據(jù)以x±s表示，兩組之間的均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　(1)AS患者外周血中的HMGB-1的含量比健康人外周血中的含量明顯增高。
　　(2)AS組外周血中的TGF-β1和IL-10含量比對(duì)照組明顯降低。
　　(3)AS組外周血中IL-6、IL-17A、IL-23的含量較對(duì)照組明顯增高。
　　(4)隨著HMGB

5、-1的濃度逐漸增加，封閉TLR4受體的CD4+T細(xì)胞分泌IL-10的功能增強(qiáng)，隨著HMGB-1刺激的濃度逐漸增加，未封閉TLR4受體的CD4+T細(xì)胞分泌IL-10的功能反而減弱。
　　(5)隨著HMGB-1的濃度逐漸增加，封閉TLR4受體的CD4+T細(xì)胞分泌抑炎性細(xì)胞因子TGF-β1的功能增強(qiáng)，而未封閉TLR4受體的CD4+T細(xì)胞分泌TGF-β1的功能減弱。
　　結(jié)論：動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血中促炎性細(xì)胞因子和抑炎性細(xì)胞因子與

6、健康人的水平存在較大的差異，本研究通過體外不同濃度的HMGB-1與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，未封閉和封閉TLR4受體的CD4+T細(xì)胞分泌TGF-β1、IL-10的功能是不同的，隨著的HMGB1刺激濃度增加，未封閉TLR4受體的CD4+T細(xì)胞的分泌功能減弱，而封閉TLR4受體的CD4+T細(xì)胞分泌功能增強(qiáng)。AS患者外周血中HMGB-1、TGF-β1、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23的含量與健康人之間差異較大，促炎性細(xì)胞因子水平明