芍藥苷通過A1腺苷受體調(diào)節(jié)MAPKs通路及Bcl-2表達抑制膿毒癥小鼠心功能障礙的作用研究.pdf

1、目的：研究A1腺苷受體在芍藥苷抑制膿毒癥小鼠心功能障礙中的作用機制
　　方法：
　　1.采用SPF級體重在30-35g之間的雄性昆明小鼠，使用經(jīng)典的盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（CLP）復(fù)制小鼠膿毒癥模型并延用前期實驗探索的合適的Pae（20 mg/k g，0.1 ml/10 g）和DPCPX（特異性A1腺苷受體阻斷劑，1 mg/kg）劑量。小鼠隨機分為8組，分別為：A:CLP+DMSO（以50％的二甲基亞砜作為DPCPX的藥物溶劑）+H

2、2O；B:CLP+DMSO+Pae；C:CLP+DPCPX+H2O；D:CLP+DPCPX+Pae；E:Sham+DMSO+H2O；F:Sham+DMSO+Pae；G:Sham+DPCPX+H2O；H:Sham+DPCPX+Pae。
　　2.造模術(shù)后12 h切取心臟組織經(jīng)固定、脫水、包埋、切片、HE染色后制成玻片標本，于熒光顯微鏡下直接觀察、并攝片，觀察小鼠心肌組織的形態(tài)學(xué)改變。
　　3.造模術(shù)后6 h經(jīng)眼球摘除采血法采集全

3、血，收集血清樣品；立即處死后留取心臟組織制成心肌勻漿提取液。運用Lumine x xMAP技術(shù)檢測各組小鼠血清及心肌中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)，白介素-6(IL-6)，白介素-12(IL-12)，白介素-10(IL-10)，干擾素-γ(IFN-γ)的水平，觀察Pae和DPCPX對膿毒癥小鼠血清及心肌組織中的細胞因子的影響。
　　4.造模術(shù)后6 h的小鼠心臟組織，研磨成勻漿后提取上清液，Wester

4、n blot方法測定各組膿毒癥小鼠心臟組織勻漿上清液中P38。ERK。JNK的磷酸化與非磷酸化蛋白以及Bcl-2的表達水平，研究腺苷A1受體在芍藥苷抑制膿毒癥小鼠細胞因子和心肌損傷或凋亡中的保護作用機制。
　　結(jié)果：
　　1.在熒光顯微鏡下可見CLP各模型組均可見心肌細胞水腫，心肌纖維排列紊亂、橫紋欠清晰；其中芍藥苷治療組小鼠心肌的病理改變較CLP模型組明顯減輕；抑制劑組、芍藥苷與抑制劑合用組小鼠的組織水腫、心肌纖維紊亂則比

5、模型組明顯加重；假手術(shù)各組小鼠則呈現(xiàn)正常組織學(xué)形態(tài)。
　　2.膿毒癥小鼠CLP組心肌組織中促炎因子TNF-α。IL-1β。IL-6。IL-12。IFN-γ及抗炎因子IL-10的濃度明顯高于Sha m各組(P<0.05)，各S ha m組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。其中，各促炎因子的CLP+DMSO+Pae組低于CLP+DMSO+ H2O組、CLP+DPCPX+H2O組高于CLP+DMSO+H2O組、CLP+DPCPX+Pae組

6、高于CLP+DMSO+Pae組(P<0.05)?？寡滓蜃覫L-10則相反。
　　3. Western blot法測定顯示，P38。ERK。JNK的磷酸化水平明顯高于Sham各組(P<0.05)。Sham組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。其中，CLP+DMSO+Pae組低于CLP+DMSO+H2O組、CLP+DPCPX+H2O組高于CLP+DMSO+ H2O組、CLP+DPCPX+Pae組高于CLP+DMSO+Pae組(P<0.05