版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、芋螺毒液是海洋軟體動(dòng)物芋螺進(jìn)行防御、捕食和競(jìng)爭(zhēng)的有力武器。它的成分復(fù)雜,主要是一類(lèi)分子量小、生理活性高的混合多肽,稱(chēng)之為芋螺毒素。芋螺毒素作用于多種神經(jīng)靶位點(diǎn),并具有高度選擇性,可開(kāi)發(fā)為治療神經(jīng)類(lèi)疾病的多肽藥物,同時(shí)作為神經(jīng)生物學(xué)的工具探針廣泛使用。
本實(shí)驗(yàn)室從中國(guó)南海信號(hào)芋螺(Conus litteratus)中分離純化得到一種T-超家族毒素,半胱氨酸骨架為CC-C-C,命名為lt5d,為電壓門(mén)控的鈉離子通道抑制劑。同時(shí)
2、從cDNA文庫(kù)中得到一個(gè)L-超家族毒素,半胱氨酸骨架為C-C-C-C,命名為lt14a,是配體門(mén)控的乙酰膽堿通道拮抗劑。2種毒素都具有潛在的鎮(zhèn)痛活性。
本論文根據(jù)2種信號(hào)芋螺毒素的氨基酸序列,進(jìn)行了化學(xué)固相合成。采用NMR的方法解析了lt14a的空間結(jié)構(gòu)。在200 ms混合時(shí)間,300 K溫度下,共得到79個(gè)NOE。計(jì)算后得到200個(gè)模擬產(chǎn)物,取能量最低的20個(gè)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,主鏈的RMSD值為0.37±0.17 A,含有2
3、個(gè)反向平行的β折疊和3個(gè)轉(zhuǎn)角,形成4個(gè)氫鍵,同時(shí)推測(cè)lt14a的二硫鍵連接方式為1-3,2-4。
由于lt5d的NMR譜圖上得到的NOE比較少,所以我們利用Insight II和Hyperchem8.0軟件對(duì)lt5d的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了計(jì)算機(jī)結(jié)構(gòu)模擬。lt5d與lt14a的空間結(jié)構(gòu)類(lèi)似,以β-折疊和轉(zhuǎn)角為主要結(jié)構(gòu),第6位帶正電的Lys突出結(jié)構(gòu)平面,推測(cè)與鈉離子通道直接作用,因此對(duì)其生物活性有重要影響。
為進(jìn)一步探討芋
4、螺毒素結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系,我們?cè)O(shè)計(jì)合成了3個(gè)突變體,分別為lt14a的突變體[K7A]-lt14a、lt5d的2個(gè)突變體[K6A]-lt5d與lt5d-2P,希望通過(guò)多肽改造發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵的氨基酸殘基。
分別在組織水平和整體動(dòng)物水平對(duì)2種天然芋螺毒素和3種突變體進(jìn)行活性檢測(cè)。電生理結(jié)果表明,在100μM的濃度下,lt14a及[K7A]-lt14a、lt5d及l(fā)t5d-2P在給藥15分鐘后都對(duì)蛙坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位起到不同程度的抑制
5、作用,[K6A]-lt5d在給藥30分鐘內(nèi)沒(méi)有抑制作用。整體動(dòng)物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,lt14a、[K7A]-lt14a。lt5d與lt5d-2P都具有不同程度的鎮(zhèn)痛活性,[K6A]-lt5d則喪失了鎮(zhèn)痛活性。此外,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示,5種多肽對(duì)人張氏肝細(xì)胞Chang liver沒(méi)有毒性,但輕微影響肝癌細(xì)胞HepG2的存活率,使其降低到70-90%。
構(gòu)效關(guān)系的研究結(jié)果表明,反向平行的β-折疊結(jié)構(gòu)和2對(duì)二硫鍵,使lt14a保持了
6、穩(wěn)定的空間構(gòu)象。第7位帶正電的Lys突變成非極性的Ala后提高了生物活性,結(jié)構(gòu)中的β-折疊沒(méi)有受到突變的影響,但由于斥力降低,突變體的空間構(gòu)象變得緊密,同時(shí)疏水表面連接成片,有利于配體受體之間的相互結(jié)合。lt5d中,帶正電的Lys突變后活性大幅下降,幾近喪失,證明Lys是關(guān)鍵氨基酸,與鈉離子通道有直接作用。Pro和Asp對(duì)lt5d的結(jié)構(gòu)與活性影響均不大。
本文的研究為改造多肽、提高芋螺毒素的鎮(zhèn)痛活性和降低分子大小提供了理論
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- α-芋螺毒素的基因結(jié)構(gòu)及唐草芋螺新型神經(jīng)毒素的研究.pdf
- 30570.信號(hào)芋螺m超家族和a超家族毒素的結(jié)構(gòu)功能研究
- 作用于電壓門(mén)控鈉離子通道的信號(hào)芋螺毒素的結(jié)構(gòu)與功能研究.pdf
- 38876.芋螺毒素溶液結(jié)構(gòu)研究
- 中國(guó)南海新型芋螺毒素的研究和結(jié)構(gòu)鑒定.pdf
- ψ-芋螺毒素MⅦA的表達(dá)與純化.pdf
- 芋螺多肽conantokin及其類(lèi)似物的戒毒功能研究以及SO-3的結(jié)構(gòu)與鎮(zhèn)痛關(guān)系研究.pdf
- AcMNPV中類(lèi)芋螺毒素基因的功能分析.pdf
- 新芋螺毒素SO-3鎮(zhèn)痛作用的離子通道機(jī)制研究.pdf
- 信號(hào)芋螺毒管基因表達(dá)分析及幾種芋螺多肽的天然純化、重組表達(dá)與活性鑒定.pdf
- 中國(guó)南海新型芋螺毒素研究.pdf
- α-芋螺毒素TeA21與LiC22氧化折疊及其活性研究.pdf
- 1、重組蓖麻毒素A鏈蛋白的表達(dá)、純化及生物學(xué)活性的測(cè)定2、芋螺毒素MⅦA基因的融合表達(dá)及其鎮(zhèn)痛活性的測(cè)定.pdf
- 線紋芋螺o超家族毒素s6.7、s6.9的結(jié)構(gòu)與功能初探
- 中國(guó)南海信號(hào)芋螺毒素It14a的藥理毒理學(xué)研究.pdf
- 芋螺毒素的基因克隆、表達(dá)及分離純化的研究.pdf
- 虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒素-Ⅰ和ω-芋螺毒素MVIIA嵌合體的合成和活性鑒定.pdf
- 中國(guó)南海新型芋螺毒素的化學(xué)合成、活性測(cè)定及表達(dá)條件初探.pdf
- 一種新型芋螺多肽—S03的鎮(zhèn)痛作用及電生理活性研究.pdf
- 抗ω-芋螺毒素MⅦA單克隆抗體的制備與鑒定.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論