LncRNA NBAT1對膀胱癌5637細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其慢病毒載體的構(gòu)建.pdf

1、目的：檢測長鏈非編碼RNA成神經(jīng)細(xì)胞瘤相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1（neuroblastoma associated transcript1，NBAT1）在人膀胱癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況，并探討NBAT1基因表達(dá)下調(diào)對膀胱癌5637細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。通過構(gòu)建shRNA慢病毒載體進(jìn)一步研究NBAT1基因在膀胱癌細(xì)胞中具體功能及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測7種膀胱癌細(xì)胞株（RT4、5637、EJ、J82、TCC-SUP、T24和

2、UM-UC-3）中NBAT1mRNA的表達(dá)水平，分析其與膀胱癌細(xì)胞惡性程度的關(guān)系。將靶向NBAT1基因的特異性siRNA轉(zhuǎn)染膀胱癌5637細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測NBAT1基因的表達(dá)變化。然后，分別采用CCK-8法、細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Hoechst染色法以及Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測并分析NBAT1基因表達(dá)下調(diào)對膀胱癌5637細(xì)胞增殖活力、遷移、侵襲及順鉑誘導(dǎo)后細(xì)胞凋亡的影響。構(gòu)建NBAT1基因和陰性對照慢病毒shRNA

3、載體，將其包裝成病毒顆粒，進(jìn)而感染目的細(xì)胞。
　　結(jié)果：NBAT1在惡性程度較低的膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤細(xì)胞RT4中的表達(dá)水平明顯高于惡性程度較高的膀胱移行上皮癌細(xì)胞5637、EJ、J82、TCC-SUP、T24和UM-UC-3（P值均＜0.01）。特異性siRNA轉(zhuǎn)染膀胱癌5637細(xì)胞后，NBAT1基因表達(dá)被明顯抑制（P＜0.01），5637細(xì)胞的增殖活力、遷移及侵襲能力均明顯增強(qiáng)（P值均＜0.01），然而順鉑誘導(dǎo)的5637細(xì)胞凋亡