miR-29b在特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化中的抗纖維化作用.pdf

1、背景與目的：
　　特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis, IPF）是一種原因不明、出現(xiàn)在成人、局限于肺、進(jìn)行性致纖維化的間質(zhì)性肺炎。肺泡上皮細(xì)胞的損傷，導(dǎo)致上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）發(fā)生，可使細(xì)胞外基質(zhì)蛋白（extracellular matrix, ECM）大量產(chǎn)生增多，導(dǎo)致ECM過度積聚，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，最終導(dǎo)致肺間質(zhì)

2、纖維化發(fā)生和肺功能受損。microRNA-29b（miR-29b）是一個(gè)與纖維化疾病緊密相關(guān)的miRNA，在多器官臟器纖維化調(diào)控中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。miR-29b可直接抑制多種膠原蛋白表達(dá)，參與包括TGF-β/Smad在內(nèi)的多條與EMT相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控，在ECM的異常積聚所導(dǎo)致的纖維化中扮演著不可或缺的重要作用。提示 miR-29b具有阻止纖維化發(fā)生發(fā)展的可能性，具有一定程度的抗纖維化潛能。本研究通過將 miR-29b的類似物（m

3、imic）轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的人肺泡上皮細(xì)胞中，探討上調(diào)miR-29b表達(dá)對(duì)肺泡上皮細(xì)胞中EMT發(fā)生發(fā)展的影響。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)人胚肺泡上皮細(xì)胞；
　　2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time PCR）檢測miR-29b表達(dá)水平，以及細(xì)胞上皮（E-cad）和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物（α-SMA和COL1A1）的mRNA表達(dá)水平；
　　3. Western blot方法檢測Smad3蛋白及其磷酸化（p-Smad3

4、）的表達(dá)，以及細(xì)胞上皮（E-cad）和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物（α-SMA和COL1A1）的蛋白表達(dá)；
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以X?S表示，各組之間采用單因素方差分析，兩組之間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1. TGF-β1誘導(dǎo)組細(xì)胞由正常的鵝卵石形或多角形轉(zhuǎn)變?yōu)樗笮巍⒓忓N形，細(xì)胞間連接變松散，呈現(xiàn)間充質(zhì)細(xì)胞形態(tài)；m

5、iR-29b轉(zhuǎn)染組細(xì)胞形態(tài)對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組細(xì)胞形態(tài)有明顯改變，呈現(xiàn)類似鵝卵石形或多角形上皮形態(tài)，而NC組細(xì)胞形態(tài)仍呈間充質(zhì)細(xì)胞形態(tài)，對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組無明顯變化。
　　2.與空白對(duì)照組比較，TGF-β1誘導(dǎo)組E-cad mRNA表達(dá)顯著下降，α-SMA和COL1A1 mRNA表達(dá)顯著升高，提示經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)發(fā)生EMT。與TGF-β1誘導(dǎo)組比較，miR-29b轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染miR-29b mimic48h后，miR-29b

6、表達(dá)升高（P<0.05）。E-cad mRNA表達(dá)升高，α-SMA和COL1A1 mRNA表達(dá)下降，對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；而NC組E-cad、α-SMA和COL1A1 mRNA表達(dá)無明顯變化，對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.與空白對(duì)照組比較，TGF-β1誘導(dǎo)組的 E-cad蛋白表達(dá)明顯減少，磷酸化Smad3蛋白（p-Smad3）、α-SMA和 COL1A1蛋

7、白表達(dá)明顯增高，提示經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)發(fā)生 EMT；與 TGF-β1誘導(dǎo)組比較，miR-29b轉(zhuǎn)染組的 E-cad蛋白表達(dá)增高，p-Smad3、α-SMA和COL1A1蛋白表達(dá)減少，對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；而NC組E-cad、p-Smad3、α-SMA和COL1A1蛋白表達(dá)無明顯變化，對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　miR-29b表達(dá)水平上調(diào)，可