肝臟缺血-再灌注損傷對老年患者術后認知功能的影響.pdf

1、目的：通過對肝臟部分切除手術不同肝門阻斷方式的比較，探討肝臟缺血/再灌注損傷對老年患者術后認知功能的影響及IL-6、TNF-α的表達。
　　方法：選擇行擇期肝臟部分切除手術患者40例，性別不限，年齡65～80歲，體重50～80Kg，心功能Ⅱ～Ⅲ級，ASA分級Ⅱ～Ⅲ級；按照 Child-Pugh分級標準選擇肝功能分級 A級，小學以上文化程度，無藥物成癮史、無精神病史。隨機將患者分為2組(n=20)：對照組（ CON組）和肝門阻斷組（

2、缺血再灌注 I/R組），對照組僅行肝臟部分切除術不阻斷肝門。麻醉誘導：咪唑安定0.03 mg.kg-1、異丙酚0.5～1 mg.kg-1、舒芬太尼0.3～0.4μg kg-1、順式阿曲庫銨0.2 mg.kg-1，進行氣管內(nèi)插管，接麻醉機，IPPV模式通氣， PETCO2維持在35～40 mmHg。麻醉維持：全憑靜脈，TCI模式，設定瑞芬太尼血漿靶濃度3～5 ng.ml-1、異丙酚血漿靶濃度1～3μgml-1，間斷靜脈推注順式阿曲庫銨0.

3、01～0.02mg/kg/h，BIS值術中維持在40～60。記錄術中血氧飽和度（SPO2）、平均動脈壓（MAP）、體溫（T）和心率（HR）。分別于手術前1天、術后第4天留取血液標本，檢測 IL-6、TNF-α含量及谷草轉氨酶（AST）、谷丙轉氨酶（ALT）的變化，同時進行一次神經(jīng)心理學測評（如：累加測試、數(shù)字符號測試、循跡連線測試A/B、順/倒背數(shù)字廣度等），根據(jù)Murkin JM推薦的Z分計算法對術后患者是否有認知功能障礙進行判斷：即

4、將術后神經(jīng)心理學測評分與術前測評分之差的絕對值除以該測試項目健康對照組基準值（第一次測試結果）的標準差,即為該單項的Z分值,各單項Z分值相加除以基準Z值相加的標準差得到復合Z分,兩次單項Z分值或復合Z分大于或等于1.96，則判定為術后認知功能障礙。統(tǒng)計學處理：采用 SPSS15.0進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料比較采用 X2檢驗，計量資料以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析,組內(nèi)比較采用配對 t檢驗， P＜0.05為有統(tǒng)計學差異。
　

5、　結果：40例患者均完成實驗測試。兩組一般情況以及不同時間點的生命體征比較無統(tǒng)計學差異。
　　1.CON組在術后第4天血漿IL-6為267.81±52.63ng/L、TNF-α為2.96±0.32μg/L相比術前表達明顯增加（P＜0.05)；I/R組在術后第四天 IL-6為353.29±61.46ng/L、TNF-α為11.35±1.27μg/L高于術前1天（P＜0.05)及 CON組在術后第四天的數(shù)值（P＜0.05)。
　

6、　2.與術前相比，兩組患者術后谷丙轉氨酶，谷草轉氨酶增加，術后第四天達高峰，I/R組明顯高于CON組（P＜0.05)。
　　3.神經(jīng)心理學測評結果：CON組有4例患者Z值大于1.96、I/R組有11例患者Z值大于1.96，POCD的發(fā)生率分別為16％和55%，I/R組高于CON組（P＜0.05)。
　　結論：肝臟缺血再灌注損傷可導致老年患者術后認知功能障礙的發(fā)生機率增加，并伴隨血漿IL-6和TNF-α表達增強（P＜0.05）

7、。
　　目的：通過對老年大鼠不同時程的肝臟缺血/再灌注損傷術后行為學實驗的觀察，以及對大鼠海馬 CA1區(qū)突觸群峰電位的測量、PKCγ(蛋白激酶Cγ亞型)及NF-κB（核因子-κB）表達的觀測。探討肝臟缺血/再灌注損傷對老年大鼠術后認知功能的影響。
　　方法：選擇經(jīng)水迷宮實驗篩選后合格的老年雄性 SD大鼠160只，年齡20—25月，體重300-350g。制作大鼠肝實質(zhì)部分缺血模型：用無損傷動脈夾夾住大鼠肝門靜脈和肝左動脈，觀察

8、被阻斷區(qū)肝葉顏色變化（暗紅色改變），同時監(jiān)測大鼠尾動脈血壓的變化（使用 BP-98A無創(chuàng)血壓儀）。隨機將大鼠分為4組，每組40只；1.假手術組(Sham)：僅開腹、游離肝動脈及肝靜脈、不進行任何肝臟動靜脈阻斷；2.缺血20、30、40 min/再灌注組：三組大鼠肝門靜脈及肝左動脈分別阻斷20、30、40min后，隨即松開動脈夾再灌注；分別記作 I/R（20）組、I/R（30）組，I/R（40）組，各組再灌注30min后，分別切取缺血區(qū)的

9、部分肝臟組織（2mm*2mm*2mm）標本以備用。為避免術后感染，模制造成功后進行抗感染治療3天。4組大鼠每組組內(nèi)再隨機對半分成兩組,每組20只，分別進行Morris水迷宮實驗及避暗實驗。Morris水迷宮分為兩個階段：第一階段，術后第4～10天行定位巡航試，觀測比較定位巡航潛伏期時間長短；第二階段，術后第11～18天行空間探索實驗，觀測穿環(huán)次數(shù)、平均速度等。各階段實驗結束后，大鼠放入密閉小容器，乙醚麻醉后，快速斷頭取腦，放入0～4℃人

10、工腦脊液中，稍變硬后，分離海馬，并沿矢狀面將其切成0.4 mm厚的腦片，放入人工腦脊液中，34℃孵育備用，人工腦脊液中持續(xù)通入混合氣體95%O2和5%CO2。雙脈沖方波刺激海馬 CA3區(qū) Schaffer側支，記錄海馬 CA1區(qū)錐體細胞誘發(fā)的群峰電位（population spike，PS）的峰值；另取部分腦片行尼氏體染色電鏡觀察海馬神經(jīng)元細胞尼氏體的機構變化，以及免疫組化染色分析 NF-κB、PKCγ的表達。數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析：SPS

11、S15.0統(tǒng)計軟件，以x±s形式表示數(shù)據(jù)，組間比較采用單因素方差分析(ANVOA)，認為P＜0.05有統(tǒng)計學差異。
　　結果：
　　1.缺血區(qū)肝組織電鏡下的形態(tài)學比較：與 Sham組比較， I/R（20）、I/R（30）、I/R（40）組的線粒體腫脹、有空泡變性、嵴破壞、足腫、溶酶體、核糖體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少。其中I/R（40）組表現(xiàn)最為明顯。
　　2.水迷宮實驗比較：與 Sham組相比，I/R（20）、I/R（30）、

12、I/R（40）組于術后第4～10天定位巡航試驗中的潛伏期時間比 Sham組長(P<0.05)，有統(tǒng)計學差異；與I/R（20）、I/R（30）組相比，I/R（40）組于術后第7～10天定位巡航潛伏期時間較長(P<0.05)，有統(tǒng)計學差異。與 Sham組比較：I/R（40）組于術后第11天空間探索實驗穿環(huán)次數(shù)、平均速度、平均時間低于Sham組，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；I/R（20）、I/R（30）組與 Sham組比較無統(tǒng)計學差異；術后

13、第18天，空間探索中的各實驗指標比較差異無統(tǒng)計學意義。
　　3.避暗實驗比較：與 Sham組比較，I/R（20）、I/R（30）及 I/R（40）組在術后第4～8天，活動路線錯誤次數(shù)和潛伏期時間較 Sham組高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。
　　4.到術后第10天，各組大鼠潛伏期和活動路線錯誤次數(shù)比較，無統(tǒng)計學差異。5.光鏡下 I/R（40）組在術后第10天空間探索實驗結束后，海馬尼氏體排列整齊、數(shù)量較 I/R（20）及

14、I/R（30）組有所減少，且胞漿腫脹；其它各組海馬神經(jīng)元、尼氏體、細胞核結構未見無明顯異常，術后第18天，光鏡下見緊密排列，尼氏體結構正常，各組大鼠未見異常。
　　6.海馬腦片神經(jīng)電生理實驗：與 Sham組相比， I/R（20）、I/R（30）、I/R（40）組于術后第10天海馬 CA1區(qū)錐體細胞誘發(fā)的群峰電位（ population spike，PS）的峰值低于 Sham組，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；與 I/R（20）、I/

15、R（30）組相比，I/R（40）組于術后第10天海馬CA1區(qū)錐體細胞誘發(fā)的PS電位峰值低，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；到術后第18天時，各組群峰電位（PS）峰值無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　7.海馬 CA3區(qū) PKCγ及 NF-κB的表達：術后第10天，與 Sham組比， I/R（20）、I/R（30）和 I/R（40）PKCγ及 NF-κB的表達均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；其中 I/R（40）組 PKCγ陽性細胞表達