人肥胖基因在畢赤酵母中的表達.pdf

1、肥胖基因編碼的蛋白質（leptin）是反映體內脂肪含量和調節(jié)體重的重要信號因子，leptin能顯著降低脂肪組織數(shù)量、促進青春期發(fā)育，對機體的免疫應答、繁殖功能、神經內分泌等功能具有重要的作用。 本文根據已報道的人肥胖基因cDNA序列設計引物，PCR擴增出入肥胖基因的cDNA編碼序列，然后將此定向克隆至畢赤酵母分泌型表達載體pPIC9K的α因子信號肽編碼序列3'端，構建成重組酵母表達載體，測序分析表明該cDNA序列由438個核苷酸

2、組成，編碼146個氨基酸組成的多肽。用化學方法轉化畢赤酵母GS115，經PCR鑒定證實，目的基因整合到重組酵母菌染色體中，對重組酵母進行G418篩選和4天的誘導表達，然后對陽性克隆進行了為期4天的誘導表達，SDS—PAGE未檢測到目的產物的表達。 根據巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)的密碼子偏愛性，對肥胖基因進行了簡并改造和人工合成，然后將改造過的人肥胖基因以正確的讀碼框架插入到酵母分泌型表達載體pPIC9K的α因子信號肽編碼序列3'端，