NDRG2在結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)及其功能的初步研究.pdf

1、人NDRG2基因（N-myc downstream-regulated gene 2）是本課題組于2000年用消減雜交法從正常成人全腦cDNA文庫(kù)中發(fā)現(xiàn)和獲得的新序列。其全長(zhǎng)為2,024bp。NDRG2基因含有16個(gè)外顯子和15個(gè)內(nèi)含子，定位于染色體14q11.2，編碼一個(gè)含有357個(gè)氨基酸殘基、分子量約為40kDa的蛋白質(zhì)。已報(bào)道該家族共有四個(gè)成員：NDRG1、NDRG2、NDRG3和NDRG4，其中NDRG4又分為三個(gè)亞型：NDRG

2、4-B、NDRG4-Bvar和NDRG4-H。該家族各成員間的氨基酸殘基序列同源性很高，但在各組織間的表達(dá)水平有明顯差異。目前，人NDRG2的具體功能還不是很清楚，本課題組初步研究結(jié)果顯示，該基因在多種正常組織中高表達(dá)，而在某些腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系中低表達(dá)或無表達(dá)；NDRG2可誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞的分化，這些結(jié)果提示：NDRG2基因與腫瘤細(xì)胞分化、增殖密切相關(guān)。
　　為了深入研究NDRG2基因的功能，闡明其在體內(nèi)的作用機(jī)制，弄清具體的信

3、號(hào)傳導(dǎo)通路及其如何與其它分子相互作用。本實(shí)驗(yàn)分兩個(gè)部分，第一部分，我們首先運(yùn)用RealtimeRT-PCR和Western-blot法，檢測(cè)丁酸鈉誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞分化后NDRG2的差異表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，NDRG2mRNA和蛋白水平逐漸升高，提示NDRG2與結(jié)腸癌細(xì)胞的分化密切相關(guān)，但是其機(jī)制還不是很清楚，需要進(jìn)一步研究。
　　第二部分，用腺病毒介導(dǎo)NGRG2（Ad-NDRG2）轉(zhuǎn)染低表達(dá)NDRG2的人結(jié)腸癌細(xì)胞H

4、T-29，western blot及RT-PCR方法檢測(cè)外源性NDRG2基因的表達(dá),借助MTT、流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)NDRG2轉(zhuǎn)染前后人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29的生物學(xué)行為進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)NDRG2過表達(dá)后，明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，提示NDRG2具有抑制腫瘤生長(zhǎng)的功能。
　　結(jié)論：
　　1.結(jié)腸癌細(xì)胞系經(jīng)丁酸鈉誘導(dǎo)分化后NDRG2的表達(dá)隨著分化進(jìn)程升高，說明NDRG2與結(jié)腸癌細(xì)胞的分化密切相關(guān)。
　　2.Ad-NDRG2轉(zhuǎn)